泥鳅消化道指数及消化酶活性分布的研究
第２８卷第５期
２００９年５月
水产
ＦＩＳＨＥＲＩＥＳ
科学
Ｖ０１．２８Ｎｏ．５Ｍａｙ２００９
ＳＣＩＥＮＣＥ
泥鳅消化道指数及消化酶活性分布的研究
陈苏维１’２，吉
红２，朱文东１，熊传喜３，曹福余２
安康７２５０００；２．西北农林科技大学
（１．安康学院农学与生命科学学院，陕西
动物科学学院，陕西杨陵７１２１００；３．华中农业大学水产学院，湖北武汉４３００７０）
摘要：研究了泥鳅消化道指数及消化酶活性在肠道不同部位（前肠、中肠及后肠）和肝胰脏的分布。试验结果表明．泥鳅比肠长为０．３３５士０．００６，比肠质量为０．０２１土０．００２．比肝质量为０．０１５士０．００１，其特征偏肉食性。泥鳅肝胰脏淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶的活性均极显著高于其他部位，分别为（４５．４６４士
２．４４２）、（５８０．５１５士１２．２８２）、（２８．８８９士３．８４９）Ｕ／ｍｌ。关键词：泥鳅；消化道指数；消化酶；活性分布中图分类号：￥９６５．１９９
文献标识码：Ａ
文章编号：１００３—１１１１（２００９）０５．０２７２－０４
泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓ彻ｇ“洲ｉｃｎ甜ｄｎ￡”ｓ）生命力强，分布广泛，营养丰富，对肝炎、小儿盗汗、痔疮下坠、皮肤瘙痒、跌打损伤、手指疔疮、阳萎、腹水和乳痈等症均有良好的疗效。作为底栖生物，泥鳅对于水环境污染程度及污染物种类均起着一定的指示作用，常作为水污染指示生物。目前我国很多地方大规模养殖泥鳅，尤其是江苏省赣榆县，泥鳅养殖已成为当地的一种产业。但目前市场上泥鳅人工配合饲料的饲料系数较高。笔者对泥鳅的消化道指数及消化酶活性分布进行了初步的研究，以期为泥鳅人工配合饲料的开发奠定一定的理论基础。１材料与方法１．１试验鱼
试验泥鳅购自西安市炭市街水产批发市场。一龄，健康无伤，平均体长（１４．３３８±２．６２５）ｃｍ，平均质量（１６．８１６±９．８６９）ｇ。鱼购回后在水族缸
（８０ｃｍＸ６０ｃｍ×４０
１２０００
ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ，所得上清液即为酶液。
将所得酶液按前肠、中肠、后肠和肝胰脏四个处理编号后置冰箱４℃贮存，２４ｈ内测定完毕。每个指标设３个重复，每个样本设３个平行。１．３消化道指数测定
将２４８尾样品测定体长、体质量后，取出内脏、肠道和肝胰脏分别称质量，并测定肠道长度。然后参照尾崎久雄［３］的方法测定泥鳅的比肠长（肠长与体长之比）、比肠质量、比肝胰脏质量、比内脏质量（分别以肠质量、肝胰脏质量、内脏质量与鱼体质量之比）等消化道指数。
１．４消化酶活性
１．４．１淀粉酶活性测定
用３，５一二硝基水杨酸（ＤＮＳ）法测定淀粉酶活性［４－ｓ］。淀粉酶活性定义为：在ｐＨ７．５、３７℃下，淀粉酶每分钟催化淀粉产生１ｍｇ麦芽糖为一个活性单位（Ｕ）。取２ｍ１１％淀粉溶液，在３７℃水浴中预
热５ｍｉｎ后加入１ｍｌｐＨ７．５的磷酸缓冲溶液，再加入１ｍｌ酶液准确反应５ｍｉｎ。然后加入０．４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液４ｍｌ终止反应。取该体系溶液
２ｍ１加入ＤＮＳ２
ｃｍ）暂养１周后进行测定。
１．２酶液制备
参照北京大学生物系生化教研室［１］及黄耀桐等［２３的方法制备泥鳅酶液。将泥鳅剪头部致死，然后测体长、质量（包括头部）。取出内脏，分离肠道及肝胰脏，将肠道分为前肠（肠道第一扭节前）、中肠和后肠（中、后肠平分）。剪开肠道去除内容物，用去离子水冲洗肠道内壁和肝胰脏，滤纸吸于多余水分，然后分别称取质量。以１０～１２尾鱼的同一部位合并为一个样本，对肝胰脏及各肠道组织加入１０倍质量的去离子水，在冰浴中充分匀浆后，４℃，
ｍｌ，混匀，置沸水浴中准确煮沸５
ｍｉｎ后取出冷却，用蒸馏水稀释至２５ｍ１，用分光光度计（ＵＶ一１２４０紫外分光光度计）于５４０ｎｍ波长下测定其ＯＤ值。从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，计算淀粉酶活性。
１．４．２蛋白酶活性测定
用福林酚试剂法测定蛋白酶活性［４一引。蛋白
收稿日期：２００８—０６—１６ｌ修回日期：２００８—０９—１２．
基金项目；安康学院专项经费项目（００７ＡＫＸＹ０３１）；西北农林科技大学安康水产试验示范站建设项目（２０２４２２）．
作者简介・陈苏维（１９７５一），女・讲师・硕士，研究方向：水生动物生物化学与分子生物学ｌＥ—ｍａｉｌ：ｃｈｓｗ０４（孕１６３．ｃｏｍ．通信作者：吉
红（１９６７一），男，副教授，博士，研究方向：水产动物营养与饲料ｌＥ－ｍａｉｌ：ｊｉｈｏｎ９０４０５＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ．
万方数据
第５期
陈苏维等：泥鳅消化遭指数及消化酶活性分布的研究
２７３
酶活性定义为：在ｐＨ７．５、３７℃下，蛋白酶每分钟水解酪蛋白产生１弘ｇ酪氨酸为一个酶活性单位（Ｕ）。取１．Ｏ％酪蛋白１ｍｌ，加入２ｍｌｐＨ７．５的磷酸缓冲溶液，３７℃水浴５ｍｉｎ后，加入酶液ｌ
ｍｌ，
准确反应１５ｒａｉｎ，用４ｍｌ１０％三氯乙酸终止反应，离心去除沉淀（５０００ｒ／ｍ，５ｒａｉｎ）后取上清液ｌ
ｍｌ，
再各加５ｍｌ０．５５ｍｏｌ／ＬＮａ２Ｃ０３溶液和１ｍｌ福林
酚试剂，用蒸馏水定容至１０ｍｌ。将其混匀，保温１０ｒａｉｎ后用分光光度计在６８０ｎｍ波长下测定其ＯＤ值。从酪氨酸标准曲线中查出酪氨酸含量，计算蛋白酶活性。
１．４．３脂肪酶活性测定
用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法测定脂肪酶活性‘４，５－７］。脂肪酶活性定义为：在ｐＨ７．５和３７℃下，脂肪酶每分钟催化脂肪产生１ｐ．ｍ０１分子脂肪酸为一个活性单位（Ｕ）。将４ｍ１聚乙烯醇橄榄油
乳化液和ｐＨ７．５磷酸缓冲液５ｍｌ在３７℃温浴５ｒａｉｎ后，加入１ｍｌ酶液，准确反应１５ｒａｉｎ，再加入
９５％乙醇终止反应。最后用酚酞作指示剂进行滴
定，记录０．０５ｍｏｌ／Ｌ标准ＮａＯＨ所耗用的体积，推
算脂肪酶活性。
１．５试验数据分析与处理
本试验采用单因素方差分析及多重检验（ｑ检验），用ＳＰＳＳ统计软件对数据进行分析和处理。２结果与分析２．１泥鳅消化道指数
泥鳅的比肠长为０．３３５±０．００６，比肠质量为
０．０２１士０．００２，比肝质量为０．０１５±０．００１，比内脏质量为０．１０９±０．０２３。２．２消化酶活性分布
２．２．１淀粉酶活性分布
泥鳅消化道各部位的淀粉酶活性分布见图１。由图１可见，泥鳅肝胰脏淀粉酶活性最强，为（４５．４６４±２．４４２）Ｕ／ｍｌ，其次为中肠和前肠，分别
为（１３．１４０±１．０１０）Ｕ／ｍｌ和（９．８３４±０．５４７）Ｕ／ｍｌ，占肝胰脏的２８．９０％和２１．６３％；后肠活性最
低，为（２．３３６±１．１３９）Ｕ／ｍｌ，是肝胰脏的５．１４％，肝胰脏及后肠与其他部位淀粉酶活性差异极显著（Ｐ＜０．０１），前肠与中肠之间差异不显著（Ｐ＞
０．０１）。
２．２．２蛋白酶活性分布
泥鳅消化道各部位的蛋白酶活性分布见图２。由图２可见，泥鳅肝胰脏蛋白酶活性最强，为（５８０．５１５±１２．２８２）Ｕ／ｍｌ，其次为前肠和中肠，分别为（４７７．１２３±４．６０２）Ｕ／ｍｌ和（４２６。８３０±
万
方数据５０
｛４０ｊ
妄３０
！ｉｇ链２０密裂１０
０
囊
肝胰脏
．网．囹．一．
前肠
中肠
后肠
泥鳅消化道部位
圈１泥鳅淀粉酶活性分布
４９．６６６）Ｕ／ｍｌ，占肝胰脏８２．１９％和７３．５３％。后肠活性最低，为（５．０７６±０．４０５）Ｕ／ｍｌ，占肝胰脏的Ｏ．８７％。四个部位均存在显著性差异（Ｐ＜０．０１）。
６００Ｔ
５００言４００
鑫３００
遵２００皿
嘲１００
０
肝胰
前肠
巾肠
后肠
泥鳅消化道部位
圈２泥鳅蛋白酶活性分布
２．２．３脂肪酶活性分布
泥鳅消化道各部分的脂肪酶活性见图３。由图３可见，泥鳅肝胰脏脂肪酶活性最强，为（２８．８８９±３．８４９）Ｕ／ｍｌ，前肠为（２２．２２２±１．９２５）Ｕ／ｍｌ，中肠脂肪酶活性与前肠相似，为（２２．２２２±１．６７９＞Ｕ／ｍ１，前肠与中肠脂肪酶活性占肝胰脏７６．９２％，与
肝胰脏脂肪酶活性差异显著（Ｐ＜Ｏ．０１）；后肠活性
最低，为（３．３３３±０．０００）Ｕ／ｍｌ，占肝胰脏的１１．５４％，与其他部位差异均显著（Ｐ＜Ｏ．０１）。而前肠和中肠的脂肪酶活性无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０１）。
３５
７
３０
三２５套２０
莪
蟹５
０
肝胰箭肠中肠
后肠
泥鳅消化道部位
圈３泥鳅脂肪酶活性分布
３讨论
３．１泥鳅消化道消化指数分析
泥鳅与部分肉食性鱼类消化道指数见表２。泥鳅比肠长低于黄色＿＿＿（Ｐｅｌｔｅｏｂａｒｕｓｆｕｌｖｉｄｒａｃｏ）嘲、大黄鱼（ＰｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａＣｌ＇ＯＣｅａ）‘９｜、鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ
ａ５０一
水产科学
第２８卷
ｔｕＳ）［１引、翘嘴红铂（Ｅｒｙｔｈｒｏｃｕｌｔｅｒｉｌｉｓｈａｅｆｏｒｍｉｓ）‘１１３和
华倒刺鱼巴（Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）、华鲮（Ｓｉｎｉｌａｂｅｏｒ肌一
ｄａｈｌｉ
大鳍鲮（Ｍｙｓｔｕｓｍａｃｒｏｐｔｅｒｕｓ）Ｃ１４３；其比肠质量高于翘嘴红鲴‘１¨、鲇‘１０３和大鳍鲮［１４｜。比肝质量接近于黄颡鱼‘８ｌ、鲇‘１。３和虹鳟（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ）Ｅ１引，较翘嘴红鲴‘１１３和大鳍鲮…３高。周兴华等ｍ３比较研究了中
ｒｅｎｄａｈｌｉ）和黄颡鱼消化酶活性后认为：鱼类的
蛋白酶活性可能与其比肠长呈负相关，与比肠质量和比肝质量呈正相关。由此认为，泥鳅是偏肉食性鱼类。
衰２不同鱼类消化道指数比较
３．２泥鳅消化道消化酶活性比较３．２．１淀粉酶活性分布特点
泥鳅淀粉酶活性性从肝胰脏、中肠、前肠、后肠依次呈递减趋势。这一点不同于周景祥等ｎ６３的结论：鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）、大眼蛳鲈（Ｓｔｉｚｏｓｔｅｄｉｏｎｖｉｔｒｅｕｍ））淀粉酶活性由前肠至后肠逐渐增强。叶元土等［８１却认为黄颡鱼中肠淀粉酶活性最高，前肠最低。但寿建听等ｕ７３认为，在最适温度下，肝胰脏的淀粉酶活性高于肠道。本试验期间水温平均为２６．２℃，在泥鳅生长及摄食的最佳范围内（２５．ｏ～２８．０℃），本试验所测肝胰脏淀粉酶活性高于肠道，与寿建听的研究结果相一致。
３．２．２蛋白酶活性分布特点
３．３
泥鳅肠道划分影响消化酶活性测定
泥鳅肠道（图４）不同于其他鲤形目鲤科鱼类，
如草鱼、鲤等，这些鲤科鱼肠道长，在鱼体内呈弯曲状，泥鳅的肠道较短。栾雅文［２玎将泥鳅消化道用Ｂｏｕｉｎ氏液固定，做成石腊切片，然后用窦来飞一苏木精染色、伊红复染后得知：泥鳅肠道平均长４．６８
ｃｍ，前肠管壁较厚，约４７８／．ｔｍ；中肠和后肠管壁相
对较薄，分别为２６０肛ｍ和１７８肛ｍ。在肠道前部有一明显扭节，以此来分开前肠，后半段均分为中肠和后肠。泥鳅肠道不同区域的划分直接影响消化酶测定数值，造成结果不同，这是影响泥鳅消化道
不同部位消化酶活性测定的因素之一。
泥鳅肝胰脏蛋白酶活性为（５８０．５１５±１２．２８２）Ｕ／ｍｌ，较鲤形目其他鱼类要高，如鲤肝胰脏蛋白酶活性为（７０．８±１０。３）Ｕ／ｍｌＥｌ６］；其他如青鱼（Ｍｙｌｏ－
ｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｐｉｃｅｕｓ）（４．７±２．４）Ｕ／ｍｌ、草鱼（Ｃ￡Ｐ咒ｏｐ＾口ｒ３，咒ｇｏｄｏ挖ｉｄｅｌｌｕｓ）（３．６±２．１）Ｕ／ｍｌ、鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ
图４泥鳅渭化逼
ａｕｒａｔｕｓ）（３．４±２．０）Ｕ／ｍｌ、鲢（Ｈｙｐｏ－
３．４脂肪酶活性测定方法有待改进
目前大多使用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法测定脂肪酶活性。该方法在应用过程中存在以下问题：第一，用以催化的底物聚乙烯醇橄榄油乳化液难以配制，且极不稳定，易变质；第二，用以进行滴定的０．０５ｍｏｌ／Ｌ标准ＮａＯＨ溶液易与空气中的ＣＯ：反应从而影响其浓度；第三，漓定过程中受人为因素干扰过大，例如滴定终点的确定，滴定体积的控制等。鉴于以上原因，脂肪酶活性测定值的精确性会受到影响。但该方法操作简便、耗时短、易于掌握等，目前仍一直被广泛使用。目前已有很多学者在研究脂肪酶活性测定的新方法，例如黄锡荣等［２２３提出了用分光光度法测定脂肪酶活性，江慧芳等［２朝对传统的碱滴定法（聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法）以及对硝基苯酚法和铜皂法进行了比较研究
认为：碱滴定法测定速度较快，但准确性不高；铜皂
ｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓｍｏｌｉｔｒｉｘ）（６．９±３．２）Ｕ／ｍｌ的蛋白
酶活性［１８］均远低于泥鳅。这一点也印证了泥鳅的食性偏肉食性。就泥鳅消化道不同部位蛋白酶横向进行比较发现，与淀粉酶分布类似，肝胰脏蛋白酶活性远远大于其他部位。这一点不同于陈章
宝［１９｜、吴勇［２叨的结论。他们认为淡水白鲳（Ｅｐｈｉｐｐ—ＵＳｏｒｂｉｓ）、千年笛鲷（ＬｕＯａｎｕｓｓｅｂａｅ）肠道的消化酶活
性大于肝胰脏。关于这一点，也可能是与鱼种类、食性、消化道特征相关，有待于研究证实。３．２．３脂肪酶活性分布特点
在本试验中，泥鳅肝胰脏和后肠脂肪酶活性为
（２８．８８９士３．８４９）Ｕ／ｍｌ和（３．３３３±０．０００）Ｕ／ｍｌ，
与其他部位存在显著差异，而中肠和前肠无显著性差异。肝胰脏脂肪酶活性明显大于其他部位，可能是泥鳅的主要消化器官。
万方数据
第５期
陈苏维等：泥鳅消化道指数及消化酶活性分布的研究
２７５
法结果稳定、重复性好，可用于脂肪酶活性的精确［１２］向枭。叶元土，周兴华。等．鲇的消化能力与营养价值
测量，但用时稍长；对硝基苯酚法比碱滴定法结果分析［Ｊ］．动物学杂志，２００４。３９（６）：６５－６９．更稳定、重复性更好，比铜皂法用时更短，是进行大［１３］ＨｉｄａｌｇＭ
Ｃ，ＵｒｅａＥ，ＳａｎｚＡ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｄｉ—
量快速测定脂肪酶活性的较好选择。
ｇｅｓｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅｓｉｎｆｉｓｈｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｈａｂ—ｉｔｓ：ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ
ａｎｄ
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ＤｉｇｅｓｔｉｖｅＴｒａｃｔＩｎｄｅｘａｎｄＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＤｉｇｅｓｔｉｖｅ
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Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
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Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ
ｔｒａｃｔ
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ｈａｄｌｅｎｇｔｈ（ＩＬ）／ｔｏｔａｌｌｅｎｇｔｈ（ＴＬ）ｏｆ０．３３５４－０．００６，ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｗｅｉｇｈｔ（ＩＷ）／ｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ（ＢＷ）ｏｆ０．０２１±Ｏ．００２ａｎｄｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｓｗｅｉｇｈｔ（ＨＷ）／ＢＷｏｆ０．０１５±０．００１，ｓｉｍｉｌａｒ
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ｉｎｔｈｅｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｓｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．
ｗｏｒｄｓ：Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓ口，ｚｇ“ｉＺＺｉｆ口ｚ‘ｄｎ￡“５；ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ
ｔｒａｃｔ
ｉｎｄｅｘ；ｄｉｇｅｓｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ；ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
（责任编辑：小舟）
万
方数据ｐａｓｅ（２８．８８９±３．８４９）Ｕ／ｍｌＫｅｙ
泥鳅消化道指数及消化酶活性分布的研究
作者：作者单位：
陈苏维， 吉红， 朱文东， 熊传喜， 曹福余， CHEN Su-wei， JI Hong， ZHU Wen-dong， XIONG Chuan-xi， CAO Fu-yu
陈苏维,CHEN Su-wei(安康学院,农学与生命科学学院,陕西,安康,725000;西北农林科技大学动物科学学院,陕西,杨陵,712100)， 吉红,曹福余,JI Hong,CAO Fu-yu(西北农林科技大学动物科学学院,陕西,杨陵,712100)， 朱文东,ZHU Wen-dong(安康学院,农学与生命科学学院,陕西,安康,725000)， 熊传喜,XIONG Chuan-xi(华中农业大学,水产学院,湖北,武汉,430070)
水产科学
FISHERIES SCIENCE2009,28(5)
刊名：英文刊名：年，卷(期)：
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