有效磷的测定

一、土壤样品的制备

程序等

土壤样品的制备：把挖回来的土壤样品，放在太阳下风干，直至样品充分风干，便于捣碎。风干后的土壤直接捣碎，形成小块状或颗粒状，用一塑料盆把土壤装起来。

把土壤样品混合均匀，在其中取出少量后，放置研钵中研碎，充分磨细，直至粉末状。再把粉末状的土壤样品滤过20目筛子。

用电子天平准确称出2g置于干燥的50ml塑料瓶中，自此，土壤样品制备完成。

二、土壤有效磷的测定

（0.5molL-1NaHCO3 浸提—钼锑抗比色法）

一、实验目的及说明 土壤中有效磷的含量，随土壤类型、气候、施肥水平、灌溉、耕作栽培措施等条件的不同而异。通过土壤有效磷的测定，有助于了解近期内土壤供应磷的情况，为合理施用磷肥及提高磷肥利用率提供依据。 土壤速效磷的测定中，浸提剂的选择主要是根据土壤的类型和性质测定。浸提剂是否适用，必须通过田间试验来验证。浸提剂的种类很多，近20年各国渐趋于使用少数几种浸提剂，以利于测定结果的比较和交流。我国目前使用最广学的浸提剂是0.5molL-1NaHCO3溶液

注

（Olsen法），测定结果与作物反应有良好的相关性[1]，适用于石灰性土壤、中性土壤及酸性水稻土。此外还使用0.03molL-1NH4F-0.025molL-1HCl溶液（BrayⅠ法）为浸提剂，适用于酸性土壤和中性土壤。 同一土壤用不同的方法测得的有效磷含量可以有很大差异，即使用同一浸提剂，而浸提时的土液比、温度、时间、振荡方式和强度等条件的变化，对测定结果也会产生很大的影响。所以有效磷含量只是一个相对的指标。只有用同一方法，在严格控制的相同条件下，测得的结果才有相对比较的意义。在报告有效磷测定的结果时，必须同时说明所使用的测定方法。

二、方法原理 石灰性土壤中磷主要以Ca-P（磷酸钙盐）的形态存在。中性土壤Ca-P、Al-P（磷酸铝盐）、Fe-P（磷酸铁盐）都占有一定的比例。0.5molL-1NaHCO3、（pH8.5）可以抑制Ca2+的活笥，使某些活性更大的与Ca结合的P浸提出来；同时，也可使比较活性的Fe-P和Al-P起水解作用而被浸出。浸出液中磷的浓度很低，须用灵敏的钼蓝比色法测定，其原理详见土壤全磷的测定章节。 当土样含有机质较多时，会使浸出液颜色变深而影响吸光度，或在显色出现浑浊而干扰测定，此时可在浸提排荡后过滤前，向土壤悬液中加入活性碳脱色，或在分光光度计800nm波长处测定以消除干扰。

三、实验仪器

研钵、20目筛子、电子天平、振荡器、uv-754分光光度计、振荡器、勺子、小塑料瓶

四、试剂配制 （1）0.5molL-1NaHCO3(pH8.5)浸提剂 42.0gNaHCO3（化学纯）溶于约800ml水中，

稀释至1L，用浓NaOH调节至pH8.5（用pH计测定），贮于聚乙稀瓶或玻璃瓶中，用塞塞紧。该溶液久置因失去CO2而使pH升高，所以如贮存期超过20天，在使用前必须检查并校准pH值。 （2）无磷的活性碳粉和滤纸 须做空白试验，证明无磷存在。如含磷较多，须先用2molL-1HCl浸泡过液，用水冲洗多次后再用0.5molL-1NaHCO3浸泡过液，在布氏漏斗上抽滤，用水冲洗几次，最后用蒸馏水淋洗三次，烘干备用。如含磷较少，则直接用0.5molL-1 NaHCO3处理。 （3）钼锑抗试剂 10.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O244H2O]（分析纯）溶于300ml约60℃的水中，冷却。另取181ml浓H2SO4（分析纯）慢慢注入约800ml水中，搅匀，冷却。然后将稀H2SO4液入钼酸铵溶液中，随时搅匀，再加入100ml 0.3% (m/v)酒石酸氧锑钾[K(SbO) C4H4O6

1

H2O]溶液；最后用水稀释至2升，盛于棕色瓶中，此为钼锑贮备液。 2

临用前（当天）称取0.50g抗坏血酸（分析纯）溶于100ml钼锑贮备液中，此为钼锑抗试剂，在室温下有效期为24h，在2~8℃冰箱中可贮存7天。 （4）磷标准贮备液（Cp = 100mgL-1） 称取105℃烘干2h的KH2PO4（分析纯）0.4394g溶于200ml水中，加入5ml浓H2SO4（分析纯）转入1L容量瓶中，用水定容，该贮备液可长期保存。 （5）磷标准工作液（Cp = 5mgL-1） 将一定量的磷标准贮备液用0.5molL-1NaHCO3溶液准确稀释20倍，该标准工作液不宜久存。

五、操作步骤 称取风干土样2g置于干燥的50ml塑料瓶中，加入0.5molL-1NaHCO3)浸提剂40ml，加1勺无磷活性碳，于往复振荡机上振荡301min，立即用无磷干滤纸过滤到干燥的50ml塑料瓶中。 在浸提土样的当天，吸取滤出液10.00ml放入干燥的50ml塑料瓶中，加水至30ml左右，加入5.00ml钼锑抗显色剂，慢慢摇动，使CO2逸出。再加入10.00ml水，充分摇匀，逐尽CO2定容至50ml。在室温高于15℃处放置15min后，用1cm光径比色杯在700nm波长处测读吸光度，以空白溶液（10.00ml 0.5molL-1NaHCO3溶液代替土壤滤出液，同上处理）为参比液，调节分光光度计的零点。 校准曲线 在测定土样的同时，准确吸取磷标准工作溶液0、2、4、6、8ml，分别放入50ml容量瓶中，并用0.5molL-1NaHCO3溶液10ml, 加水至30ml，加钼锑抗试剂5ml,定容至50ml, 混匀显色，同待测液一样进行比色，绘成标准曲线，最后溶液中磷浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8 mgL-1P。 六、结果计算 土壤有效磷（P），mgkg-1 = 显色液Cp *显色液体积*分取倍数/ 土壤质量

式中 Cp——从校准曲求得土壤滤出液中磷的浓度，mgL-1P 显色液体积------50ml 注释 （1）用0.5molL-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法测定结果的评价标准如下：

10 土壤有效P(mgkg-1)

土壤有效P供应标准 低（缺磷） 中等（边缘值） 高（不缺磷）

七、数据处理

1、标准曲线

绘制曲线：

得出公式：y=0.4980x-0.0102

代入数据的出：

样品1：x = 0.067mg/L 样品2：x = 0.079mg/L 样品3：x = 0.091mg/L 样品4：x = 0.085mg/L

土壤有效磷（P）：

P1 = 0.067 * 50 * （40 / 10）/ 2 mg/㎏ = 6.70 mg/㎏ P2 = 0.079 * 50 * （40 / 10）/ 2 mg/㎏ =7.90 mg/㎏

P3 = 0.091 * 50 * （40 / 10）/ 2 mg/㎏ = 9.10 mg/㎏ P4 = 0..085 * 50 * （40 / 10）/ 2 mg/㎏ = 8.50mg/㎏ P¯ = 8.05 mg/㎏

所测土壤的有效磷浓度 （P）= 8.05 mg/㎏

八、结果分析

（1）从实验的结果来看，四个重复样品的有效磷值相互间有点偏差，造成的原因有多种： 第一，有可能是吸取滤出液时取出的量有误差，不完全相等，造成偏差； 第二，有可能是定容50ml时，定容不准确造成偏差；

第三，有可能是测量时润洗比色皿，没有润洗干净，造成偏差； 第四，可能是分光光度计测量不准确，造成的偏差；

但从最终结果来看， d = [|6.70 - 8.05| + |7.90 - 8.05| + |9.10 - 8.05| + |8.50 - 8.05| ] / 4 =0.75 dr = 0.75 / 8.05 * 100% = 9.31%

结果的相对平均偏差较大，因此所测的结果不足以作为土样的有效磷值。

（2）根据用0.5molL-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法测定结果的评价标准，所测得的结果（土壤有效磷）处于5~10mg/Kg之间，因此土壤的有效磷处于中等标准（边缘值）。 假如所测的结果为准确值，则所测的土样的有效磷量少，不利于磷的种植、生长。