胶回收试剂盒

产品简介：产品简介：

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅基质材料和独特的缓冲液系统， 从TAE 或TBE 琼脂糖凝胶上回收DNA 片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、 无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp–40 kb DNA片段，回收率可达 80%以上（10kb 的DNA 片段回收率为30－50%）。

使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、测序、 文库筛选、连接和转化等实验。

产品特点：产品特点：

快速：快速：整个操作过程快速方便，几十分钟即可完成回收工作。 多样：多样：可以回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA 。

高效：高效：

独特的离心柱和精心配制的缓冲液，保证最大量回收到高纯度的目的DNA 。

注意事项：注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. 平衡液BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定

性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检 查平衡液BL 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟， 即可恢复澄清。

2. 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。 3. 如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE 电泳缓冲液。 4. 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA 造成损伤。

5. 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH 值，如pH 值大于7.5，可向含

有DNA 的胶溶液中加10–30 µl 3 M醋酸钠（pH5.2）将pH 值调到5–7之间。

6. 回收10 kb的DNA 片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗

脱的时间。

7. 回收率与初始DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率

越低。

技术支持：010-59822661/2665 WWW.TIANGEN.COM

操作步骤：操作步骤：

第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在15 ml漂洗液PW 中加入60 ml无水乙醇! 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500µl 平衡液BL ，

12,000 rpm (~13,400×g )离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

2. 将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的

离心管中，称取重量。

3. 向胶块中加入3倍体积溶胶液PN ；当回收的目的片段

度>2%时，建议使用6倍体积溶胶液PN （如凝胶重为如凝胶重为0.1 g ，其体积可视为100 µl，依此类推）依此类推）。50℃水浴放置10分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解（若胶块的体积过大若胶块的体积过大，若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）可事先将胶块切成碎块。 注意：注意：胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA 的能力较弱。的能力较弱。

4. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中），室温放置2

分钟，12,000 rpm (~13,400×g )离心30－60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。

注意：注意：吸附柱容积为800 µl ，若样品体积大于800 µl 可分批加入。可分批加入。

5. 向吸附柱CA2中加入700 µl 漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入无水乙

醇）， 12,000 rpm (~13,400×g )离心30－60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。

注意：注意：如果回收的DNA 是用于盐敏感的实验，是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW 加入后静置2－5分钟再离心分钟再离心。再离心。

6. 向吸附柱CA2中加入500 µl 漂洗液PW ，12,000 rpm (~13,400×g )离心30－

60秒，倒掉废液。

7. 将吸附柱CA2放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g )离心2分钟，尽量除尽

漂洗液。将吸附柱CA2置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。

注意：注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、酶切、PCR 等）实验。实验。 8. 将吸附柱CA2放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓

冲液EB ，（如果回收的目的片段如果回收的目的片段>10 kb ，则洗脱缓冲液EB 应置于65–70℃水浴预热）浴预热，室温放置2分钟。12,000 rpm (~13,400×g )离心2分钟收集DNA 溶液。

注意：注意：DNA 也可以用缓冲液(10 mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脱。洗脱。为了提高DNA 的回收量，回收量，可将离心可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，得到的溶液重新加回离心吸附柱中，重复步骤8。洗脱体积不应小于30 µl ，体积过体积过少影响回收效率。影响回收效率。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH 将水的pH 值调到此范围) ，pH 值低于7.0会降低洗脱效率；会降低洗脱效率；且DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。降解。

DNA 浓度及纯度检测

回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在OD 260处有显著吸收峰，OD 260值为1相当于大约50 µg/ml双链DNA 、40 µg/ml单链DNA 。

OD 260/OD280比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD Order: 010-59822688

Technical: 010-59822661/2665 Toll-free: 800-990-6057

版本号: DP080530

TIANgel Midi Purification Kit 普通琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒

（离心柱型）离心柱型）

目录号：目录号：DP209

试剂盒内容：试剂盒内容：

试剂盒组成 DP209-02 DP209-03 (50次) (200次) 平衡液BL 30ml 120ml 溶胶液PN 50 ml 2 x 100 ml 漂洗液PW 15 ml 50 ml 洗脱缓冲液EB 15 ml 30 ml 吸附柱CA2 50个 200个 收集管（2 ml）

50个 200个 说明书

1份

1份

储存条件：储存条件：

本试剂盒在室温（15–25℃）干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2–8℃。（注意：当低温贮存时，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10分钟，以平衡溶液温度。）