HPLC同时测定饮料中的6种食用色素
２０１１年第四届国际食品安全高峰论坛论文集
ＨＰＬＣ同时测定饮料中的６种食用色素
陈再洁杨慧
１．中国农业科学院农产品加工研究所，农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室，北京１００１９３；
２．西北农林科技大学动物医学院，杨凌７１２１００
摘要：利用吸附一解吸过程提取饮料中的食用色素，采用Ｕｌｔｉｍａｔｅ＠ＸＢ．Ｃ１８（４．６＂２５０ｍｍ，５ｕｒｎ）色谱柱，以甲
醇一２０ｒｅｔｏｏｌ乙酸胺溶液作流动相，梯度洗脱，紫外检测波长为２５４ｎｍ，分离食用色素，采用高效液相色谱仪测定。样品溶液的最佳ｐＨ值为６。柠檬黄、览菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝ｌ和亮蓝２的检出限分别为Ｏ．１７。０．２３，０．３７，０．３０，１．２７，１．０９
ｕｇ／ｍＬ。回收率为８９．５％一９ｒ７．３％，测定结果的相对标准偏差为１．０２％．２．９９％，线性相关系数是０．９９８５－０．９９９９。关键词：ＨＰＬＣ测定饮料食用色素
食用色素分为天然和合成色素。从矿物、植物、动水定容，配制成浓度均为１．ｔ）０Ｈｌｇ／ｍＬ的食用
物中提炼的食用色素属于天然色素。在饮料中添加一定
色素混合标准储备液。使用时，用蒸馏水稀释至所量的食用色素，可增强饮料的外观美感，激发人们的食
需浓度的混合标准溶液：
欲。但如果向饮料中任意过量添加食用色素，会对人体
实验所用其它试剂均为分析纯；产生危害。国家标准ｆｌＪ中规定食用色素柠檬黄、苋菜
实验用水为蒸馏水。
红、胭脂红、日落黄、亮蓝的最大限量分别为Ｏ．１０，０．０５，０．１．２色谱条件
０２５，０．１０，０．ＯＥＳｇ／ｋｇ，国家标准【２】中的检测方法为高效色谱柱：Ｕｌｄｍａｍ＠ＸＢ．Ｃ１８（４．６＂２５０ｍｍ，Ｓｕｍ，液相色谱法。笔者对该方法的梯度洗脱程序进行了优化，
月旭材料科技（Ｉ－海）有限公司）；流动相：甲醇．２０ｍｍｏｌ缩短了检测时间，测定饮料中的柠檬黄、苋菜红、胭脂乙酸胺溶液，流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２５４ｎｍ；梯红、日落黄、亮蓝ｌ、亮蓝２，方法操作简便，重现性好，
度洗脱；迸样量：１０ｕＬ；根据保留时间定性，峰面积能满足食用色素的定量分析要求，适合饮料厂和检测机
定量。
构对食用色素的定量检测。
梯度洗脱程序：
ｌ实验部分
１．１主要仪器与试荆
高效液相色谱仪器：伍车Ｌｃ－１００型，带紫外检测器，
上海伍丰仪器股份有限公司：
电子天平（０．０００１９），上海舜宇恒平：超声波清洗
机：昆山超声波仪器厂等
柠檬酸溶液：：２００９／Ｌ。称取２０９柠檬酸，用蒸馏水
溶解并定容至１００ＴＩｌＬ混匀；
乙醇．氨水．水混合溶液：分别精密量取无水乙醇７０ｍＬ、氨水２０ｍＬ和蒸馏水１０ｍＬ一混匀；
１．３样品测定
甲醇一甲酸（６“）混合溶液：取甲醇６０ｍｌ，甲酸４０ｍｌ
称取样品１０．ｏｇ，＋于加热板上加热煮沸去掉Ｃ０２，混匀；
冷却致室温，加人柠檬酸（碱性样品）或稀氨水（酸性稀氨水：２０ｍＩ／Ｉ，。精密量取氨水２ｍＬ，加蒸馏水样品）调节样品溶液的ｐＨ＝６，加热到６０。，将ｌｇ聚酰
定容至１００ｍＬ，混匀；
胺粉加适量水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌约
甲醇：色谱纯；
１０ｍｉｎ，用Ｇ３垂溶漏斗抽滤，先用ｐＨ－－４的水洗涤５次，聚酰胺粉：过７５ｕｍ筛；
再用甲醇．甲酸混合溶液洗涤５次，再用水洗至中性，最食用色素混合标准溶液：准确称取柠檬黄、苋菜红、后用乙醇一氨水一水混合溶液解吸５次，每次５ｍｌ，收胭脂红、日落黄、亮蓝ｌ和亮蓝２标准物质（国家标准物集解吸液，水浴挥至近干，用蒸馏水定容至５ｍＬ。经质研究中心）各０．２５０ｇ，置于２５０ｍＬ容量瓶中，用蒸馏
孔径为０．４５ｕｎｌ的针筒式滤膜过滤后，进样测定。
２０１１年第四届国际食品安全高峰论坛论文集２结果与讨论
２．１色谱图
图为食用色素的标准色谱图。
Ｏ
＇
＇口
俦霜簟
∞
簪
柏
２．２流动相
分别以甲醇．ｏ．０２ｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液、乙睛．ｏ．０２ｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液作流动相，采用相同梯度洗脱程序进行比较，色谱峰的分离度、峰型差别不大，但亮蓝在甲醇作流动相时的响应值比乙睛作流动相时大，同时考虑
到乙睛的毒性较大，且价格较贵，选择甲醇ｍ０２
ｍｏｌ／Ｌ
乙酸胺溶液作为流动相。
２．３梯度洗脱程序
设定流动相中甲醇的体积分数以不同的比例增加，
食用色素的出峰顺序为柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落
黄、亮蓝，分离效果较好。
２．４样品溶液的ｐＨ值
用柠檬酸或稀氨水调节样品溶液的ｐＵ值，结果表
明，当溶液呈酸性时，样品组分的响应值随ｐＨ值的增大而略有增加，当ｐＨ＞６时，样品组分的响应值基本不变。ｐＨ值过高时，溶液会腐蚀色谱柱及检测器，故选择样品溶液的ｐＨ＝６，样品组分既有较大的响应值，又不腐蚀检测器。
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２．５工作曲线和检出限
配制浓度均为１０，３０，５０，７０，１００ｕｇ／ｍＬ的食用色素混合标准溶液进行分析，同一浓度样品平行分析６次，取其平均值。结果表明，线性范围均为ｌＯ—１００ｕｇ／ｍＬ，
线性回归方程及相关系数见表１。按３倍信噪比计算检
出限，结果见表ｌ。
食用色素线性回归方程
相关系数
检出限峙／ｍＬ
柠檬黄
ｙ＝２２４２．２ｘ＋１７３５．３０．９９９７０．１７
苋菜红ｖ＝１７９４．５ｘ＋２３２．８６０．９９９９０．２３胭脂红
ｙ＝２４０３．９ｘ．２７４８．１０．９９９０Ｏ．３７日落黄Ｙ＝２５３０Ａｘ．８４５．９９０．９９９７Ｏ．３０亮蓝ｌｙ＝５７．６９５ｘ＋７７．６５６０．９９８５１２７亮蓝２
Ｙ＝９１．１３６ｘ．１．６９６７
Ｏ．９９８８
１．０９
２．６加标回收试验
向样品中加入一定量的食用色素混合标准溶液，考察方法的回收率及精密度，６种食用色素的加标回收率
为８９．５％—９７．３％，测定结果的相对标准偏差为１．０２％－－－２．９９％，表明本方法的准确度与精密度均较高
３结论
用高效液相色谱法检测饮料中的食用色素，准确度
和精密度均较高，能满足质量检验的要求。
参考文献：
ｆ１】ＧＢ２７６０－１９９６食品添加剂使用卫生标准．【２】ＧＢ／Ｔ５００９．３５．１９９６食品中合成着色剂的测定方法．
HPLC同时测定饮料中的6种食用色素
作者：作者单位：
陈再洁， 杨慧
中国农业科学院农产品加工研究所/农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室，北京100193 西北农林科技大学动物医学院，杨凌 712100
引证文献(2条)
1. 宋晓园 高效液相色谱在中药学、食品检测的应用概况和最新进展[期刊论文]-医药前沿 2013(17)2. 张人福,宋晓园 高效液相色谱在药学的应用概况和最近进展[期刊论文]-中国当代医药 2013(21)
引用本文格式：陈再洁. 杨慧 HPLC同时测定饮料中的6种食用色素[会议论文] 2011