实验二.芦荟粗多糖的提取
实验二 芦荟粗多糖的提取
一、实验目的
1、掌握“水提醇沉”法提取多糖的原理和方法
2、掌握高速冷冻离心机、旋转蒸发器等仪器的用法
二、实验原理
“水提醇沉法”
三、实验材料
95%乙醇、dH 2O
四、仪器及器皿
烧杯、玻璃棒、小刀、量筒、纱布、电子天平、高速冷冻离心机、旋转蒸发仪、真空泵、水浴锅、标签纸、离心管
五、步骤
芦荟（约50g ）2O 浸泡0.5h 去表皮 内层凝胶切成小块 3倍体积dH 2O 、55o C 4~5h 双层纱布过滤上清液浓缩至原体积的1/3 6倍体积冷的95%乙醇（缓慢加入并不断搅拌15~30min， 2h 后沉淀物收集）
六、作业
1、描述实验步骤
2、原理
3、如何进行定量
4、如何鉴定沉淀物为多糖
一描述实验步骤
步骤1
称取芦荟（约50g ） 然后洗净、去叶尖、叶底，用dH 2O 浸泡0.5h （除去黄色汁液）
（秤取芦荟50克，dH 2O 浸泡0.5h ）
步骤2
去表皮，内层凝胶切成小块
（芦荟去皮，将其凝胶切成小块，
凝胶呈透明质）
步骤3
用3倍体积dH 2O 、55o C 4~5h后，用双层纱布过滤取其上清液
（纱布过滤以后得到的上清液称半透明状）
步骤4
在旋转蒸发仪中将上清液浓缩至原体积的1/3，可得半透明质的液体，颜色比上清液深一些。
（旋转蒸发仪）
（浓缩以后的液体，呈半透明状，
颜色比上清液深一些）
步骤5
6倍体积冷的95%乙醇（缓慢加入并不断搅拌15~30min）
（一位同学缓慢滴加乙醇，一
位同学不停的搅拌液体）
（搅拌一段时间以后，液体开始微变
白色浑浊，可以看到很多很小的白色粒径）
步骤6
将滴加完乙醇以后的白色浑浊液体，等量装入到四只离心管中，离心10分钟，可得白色沉淀（注每一对的装入液体离心管质量应差不多，且每一只离心管液体体积不超过离心管的三分之二）
（刚装入离心管的液
体，底部开始有白色沉淀）
（离心以后，离心管底部得到白色沉淀，
沉淀量不多）
步骤7
离心管倒去上清液，留下白色沉淀，干燥，可得微量白色沉淀。
（干燥沉淀，可得微量白色沉淀）
步骤8
称量，计算得率
二原理
答：水提醇沉法：水提醇沉法是先以水为溶剂提取凝胶法中有效成分，再用不同浓度乙醇沉淀除去提取液中杂质的方法。它是利用凝胶粉中的大多数成分易溶于水和醇的特性，用水提出，并将提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶解的物质，最后制得澄明的液体。
三如何进行定量
答：（1）精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖100mg 于100mL 容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，作为对照品溶液。此标准溶液1.0mL 含葡萄糖1.0mg 。
（2）精密量取该溶液0.5mL 、1.0mL 、2.0mL 、3.0mL 、4.0mL 、5.0mL 分别置于100mL 容量瓶中，加蒸馏水定容，吸取上述溶液各2.0mL ，再加入5％苯酚溶液1.0mL ，摇匀。迅速加入硫酸5.0mL ，摇匀。室温放置5min ，90℃水浴加热15min ，冷却至室温，以蒸馏水作参比，测定在波长490nm 处的吸光度，得浓度（c ）与吸光度（A ）的线性回归方程。
（3）精密称取干燥至恒重的芦荟粗多糖10mg 于100mL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。取1.0mL ，加入5％苯酚溶液2.0mL ，然后按第2步操作，测定其吸光度。并由标准曲线方程求出溶液浓度，得出芦荟粗多糖中的总糖含量。
四如何鉴定沉淀物为多糖
答： 对芦荟多糖的鉴定利用改进的苯酚一硫酸法。苯嘞一硫酸试剂能与芦荟多糖中的己糖起显色反应，在一定波长下其吸光度的变化与多糖含量呈线性关系。采用苯酚一硫酸显色法鉴定芦荟多糖，芦荟中的多糖在硫酸的作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物共轭酚在490nm 处有最大波长，由此可以鉴定出芦荟中的多糖