正己烷对大鼠血热休克蛋白70和总抗氧化能力的影响

　　【中图分类号】R392.12 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)06－0033－01

　　【摘要】目的 研究正己烷(n-HeXane)对大鼠血中热休克蛋白(HSP70)和总抗氧化能力(T-AOC)的影响。方法 40只雄性SpragueDawley(SD)大鼠随机分成4组，即低、中、高剂量染毒组(150 mg/kg、300 mg/kg、600 mg/kg)和阴性对照组，每组10只，经腹腔注射染毒后，观察7天，用酶联免疫吸附法和试剂盒分别检测大鼠血中HSP70和T-AOC的含量。结果 各剂量组的一般情况与对照组比较均无异常；HSP70随染毒剂量增加而上升，T-AOC随染毒剂量增加而降低，与对照组差异明显(P

　　【关键词】正己烷;热休克蛋白70;总抗氧化能力

　　Effect of n- hexane on heat shock protein 70 and total antioxidant capacity in rats

　　【Abstract】 Objective To study the effect of n-hexane on heat shock protein 70 (HSP70) and total antioxidant capacity (T-AOC) in rats. Method 40 SD male rats were randomly divided into four groups. n-hexane was administered at doses of 0 mg/kg (the negative control group), 150mg/kg, 300mg/kg, 600mg/kg by intraperito-neal injection. All rats were observed for 7 days. Then all rats were sacrificed to obtain serum. The serum level of Hsp70 and T-AOC were determined. Result There were no significant differences between general situations of control group and exposure groups. Compared with the negative control group, exposure dose rising, content of Hsp70 increased, activity of T-AOC decreased among exposure groups presented a significant dose-effect relationship and significance of difference。(P 　　【Key words】 n-Hexane; heat shock protein 70 (Hsp70)；total antioxidant capacity (T-AOC)

　　正己烷是直链烷烃类化学毒物，具有高挥发性、高脂溶性和高蓄积作用特点，因其工业用途广和刺激性不大，易致职业人群中毒，严重威胁职业人群的生命安全，职业危害尤为突出，引起学者广泛关注。基于做好职业性正己烷中毒早期预防的考虑，寻找早期诊断生物指标尤为关键，本研究通过建立急性中毒动物模型，观察一般情况和检测血液中HSP70表达和T-AOC含量水平，探讨正己烷对机体早期毒作用与HSP70和T-AOC的生物学意义。

　　1 材料与方法

　　1.1.1 主要仪器与试剂：正己烷(国产分析纯)，T-AOC检测试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，HP70检验试剂盒由厦门慧嘉生物科技有限公司提供，2100型分光光度计(尤尼柯仪器有限公司)。

　　1.1.2 动物：健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，体重为180～220g，由南华大学实验动物中心提供，自由摄食和饮水，适应饲养1周后进行染毒。

　　1.2 方法

　　1.2.1 动物分组及染毒：将40只雄性SD大鼠随机分为4组，即对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只。阴性对照组大鼠仅于腹腔注射5ml／kg生理盐水，低、中、高剂量组大鼠分别以150、300、600mg／kg的剂量各染毒1次，饲养、观察和记录7天大鼠的一般情况（饮食、毛发光泽度、嬉戏活动与灵敏度、大小便性状情况和称取大鼠每天的体重）；7天后后断颈处死，抽出5ml血液，提取血清。

　　1.3 实验方法：

　　1.3.1 血清HSP70抗体滴度的测定方法（具体操作步骤按试剂盒说明书进行）：

　　①血清按1:100用封闭液稀释，每孔100μL，同时设空白、阴性和阳性对照，37℃放置2 h；②洗板5次，甩干后加入封闭液稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体，37℃放置1 h；③洗板5次，甩干后每孔加入100μLTMB显色液，37℃显色10min，每孔加入1moL/L H2SO4 100μL终止反应；④450 nm波长下，用酶标仪（Bio2Rad）测定每孔吸光度值，即样本吸光度值/阴性对照吸光度值（S/N）≥2.1判定为阳性。

　　1.3.2 总抗氧化能力（T-AOC)的测定：总抗氧化能力的检测严格按照试剂盒说明书进行，根据公式计算出它们的含量。

　　1.4 统计学处理数据均以（x±s）的表示，采用SPSS 13.0软件包进行统计分析。四组对象血清HSP70抗体和T-AOC得含量比较用单因素方差分析，组间两两比较用LSD法。以P　　2 结 果

　　2.1 正己烷对大鼠一般情况的影响：剂量组与对照组比较毛发光泽度和大小便性状无异常、嬉戏活动与灵敏度和饮食均正常,体重与对照组比较无差异。

　　2.2 正己烷对大鼠血中HSP70和T-AOC的影响：HSP70抗体水平随染毒剂量增加而增高(p=0.000)，T-AOC含量随染毒剂量增加而降低(p=0.000)，低剂量组与对照组指标含量差异有显著性(p　　3 讨论

　　作为外来有害化学刺激物［1］，进入机体后，易致生物体内环境紊乱，甚至出现急慢性中毒症状［2-3］。为了适应这急剧变化，生物体除通过交感-肾上腺髓质和下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴兴奋为主的神经内分泌反应加以干预外,还促使一些应激脂质过氧化反应与应激蛋白合成而进行调节。

　　脂质过氧化是组织细胞损伤的一个重要原因, 其作用机理与氧化产生系统和抗氧化系统动态动态失衡有关，异常情况下，如外源物质进入机体代谢时，就可产生大量氧化物-自由基［4］，超出抗氧化系统能力上限后，即激发脂质过氧化病理链式反应的发生，则攻击各种生物膜上不饱和脂肪酸，导致细胞结构和功能损伤,发生脂质过氧化毒损害。而T-AOC是体内抗氧化能力的总体表现,是抗氧化系统的主要成员,其综合反映组织抗氧化系统防止氧化物对组织损伤的能力，本研究发现总抗氧化能力活性水平随剂量增加而降低，与盛习锋［5］报道的结果基本一致。

　　有研究者指出对细胞起应激保护作用的蛋白主要是热休克蛋白家族，其中以热休克蛋白70(HSP70)在生物体内最为丰富,结构保守。生物学活性多样，有“瑞士军刀”［6］的美名，具体机制有以下几方面：一、维护细胞蛋白质稳定：新合成的HSP70与未折叠、错折叠或聚集的蛋白质相结合,使某些蛋白质解离,减少产生不溶性聚集物的危险,并帮助需要折叠的蛋白正确折叠；二、维持某些肽链的伸展状态, 以利于其跨膜转运, 在线粒体、内质网等不同区域内发挥作用;三、抗脂质过氧化作用：可抑制产生氧自由基的关键酶即烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶,通过反馈抑制作用减少氧自由基的产生,还可提高内源性过氧化酶如T-AOC活性,从而加快氧自由基的清除，本研究发现HSP70表达随染毒剂量增加而合成增强，与HSP70在严酷环境下合成增加的生物学特性相符。

　　综上所述，染毒组一般情况与对照组比较虽无差异性，但染毒组HSP70抗体水平和总抗氧化能力T-AOC活性与对照组比较差异显著 (p　　参考文献

　　［1］ 夏元洵.化学物质毒性全书.上海上海科学技术文献出版社，1991,223.

　　［2］ 林春晓,马文军,王天成,等.正己烷急性染毒对小鼠肝、肾损伤及机理探讨［J］实用预防医学,2010,17(6):1054-1056.

　　［3］ 孔玉林，陈玉雯，莫星帆.慢性正己烷中毒致周围神经病变57例临床观察［J］中国工业医学杂志,2011,24(6):434-435.

　　［4］ 齐宝宁,唐国慧,易建华,等.正己烷致大鼠过氧化损伤及肝细胞凋亡的实验研究［J］中国工业医学杂志,2007,20(3):177-179.

　　［5］ 盛习锋,周源,刘英,等.去甲丹皮酚对抗正己烷所致小鼠脂质过氧化损伤的作用［J］,湖南师范大学学报(医学版),2007,4(2):8-10.

　　［6］ Srivastava,PK,Amato,RJ.Heat-shock.proteins:The‘SwissArmy Knife’ vaccines against cancers and infectious agents.Vaccine,2001,19(1-19):2590-2597.