醋马钱子的炮制工艺研究

　　摘要：目的规范并优化醋马钱子的炮制工艺，获得最佳工艺。方法指标的评价以士的宁和马钱子碱两种生物碱的含量作为标准，通过对醋马钱子炮制工艺中的重点环节进行考察，优选关键因素进行正交试验并结合单因素优化试验，解决步骤的简化和有效生物碱尽量保留、毒性生物碱尽量降低的问题，得出最佳炮制工艺。结果通过对醋马钱子炮制工艺中重点环节的考察，优选出浸泡时间、醋液浓度和醋煮时间三个因素进行正交试验。结果显示，A3B2C1为醋马钱子最佳炮制工艺，即浸泡天数5d，白醋浓度2.5%，醋煮时间1h。其中，影响醋马钱子炮制工艺中因素的主次顺序为：醋煮时间>水浸天数>醋液浓度。结论该方法为大规模生产提供了理论基础和依据。 　　关键词：醋马钱子；炮制工艺；正交试验；单因素优化试验 　　中图分类号：R283文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）10-0066-04 　　Study on Processing Technology of Vinegar-soaked Strychnos Nux Vomica 　　ZENG Pei-yu1， GAO Ming1， HUANG Yu-mei2， WU Zhi-jian2， 　　MAI Min-xin2 JIANG Li-yun1， MA En-yao1， ZHU Qi-Liang1 　　（1. Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou 510006， Guangdong； 　　2.Chinese Medicine Pieces Factory， Guangzhou Medicinal Material Corporation， Guangzhou 510360，Guangdong） 　　【Abstract】Objective： To standardize and optimize the processing technology of vinegar-soaked Strychnos Nux Vomica to obtain the best technology. Methods： Indicative evaluation was made by taking content of strychnine and brucine as a standard. Through the inspection of key links in vinegar-soaked Strychnos processing technology， key factors were preferably chosen to conduct an orthogonal experiment and a single factor optimization test to simplify its procedure， preserve its effective alkaloids and minimize its toxic alkaloids so as to obtain the best processing technology. Results： Through the study of vinegar-soaked Strychnos processing technology， best soaking time， concentration of vinegar and vinegar-cooking time were preferably used to conduct the orthogonal test. The results showed that A3B2C1 was the best processing technology for vinegar-soaked Strychnos， i.e. 5-day soaking， 2.5% of vinegar concentration， one-hour vinegar-cooking time. Among them， the factors influencing vinegar Strychnos processing were orderly as， vinegar-cooking time>soaking days>vinegar concentration. Conclusion： The method provides a theoretical basis and foundation for mass production. 　　【Key words】vinegar-soaking Strychnos， processing technology， orthogonal test， single factor experiment 　　马钱子是马钱科植物马钱（Strychnosnux-vomica L.）的干燥成熟种子。主产于印度、缅甸、越南、斯里兰卡等地。其性味苦，温；有大毒，归肝、脾经。具止痛、通络，消肿、散结之功；用于跌打、损伤，肿痛、骨折，顽痹、风湿，麻木、瘫痪，疮毒、痈疽，咽喉肿胀等症。 　　从古至今，有许多类的马钱子炮制方法[1]，其中，以砂炒、油炸法沿用最多[2]；并且有许多关于砂烫法的研究，而醋制法却少有研究。中药标准化和规范化始终在发展，但广东地区传统沿用的醋制法[3]其炮制工艺仍处于较为粗糙的状态，浸泡、煮制、砂烫等方法细节不明确，缺乏规范性和生产技术标准，欠缺质量稳定性和可控性，不利于该炮制方法的推广和大规模生产加工。 　　为适应中药现代化进展，规范醋马钱子的炮制工艺，本研究运用HPLC化学成分检测手段，在继承的基础上对醋马钱子进行炮制工艺的研究，使其更规范化、规模化和现代化。 　　1仪器与材料 　　仪器：千分之一天平（JA3003型，上海舜字恒平科学仪器有限公司），数显鼓风干燥箱（BDMD-M-V-20型，天津泰斯特），电阻炉温度控制器（KSW型，余姚金电仪表有限公司），SMART测温枪（AR842A型，哈尔滨联华自动化仪表有限公司）。 　　原料及辅料：由广州市药材公司中药饮片厂提供的马钱子，经高明副教授（广州中医药大学）鉴定为马钱科Loganiaceae植物马钱Strychnosnux-vomica L.的干燥成熟种子；由广州市药材公司中药饮片厂提供的白醋及河砂，白醋总酸含量≥3.50 g・100mL-1。 　　试药：对照品均来源于中国药品生物制品检定研究院：马钱子碱（批号：110706-200505，纯度：95.9%），士的宁（批号：110705-201307，纯度：97.1%）；乙腈为色谱纯；三氯甲烷、甲醇为分析纯；氢氧化钠试液、无水硫酸钠、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾。 　　2方法与结果 　　2.1正交试验 　　2.1.1因素和水平的确定结合醋马钱子在1984年版《广东省中药炮制规范》[4]中的工艺记载和广州市药材公司中药饮片厂车间的实际生产，广东当地传统的醋马钱子炮制工艺均离不开水浸、醋煮及砂炒三个关键环节。 　　同时，由于在砂炒一环节中，砂炒时的温度难以控制，只生硬地利用砂炒温度、砂炒时间来作为该环节的衡量指标并不尽合理；而以传统经验判断作为控制标准则更为科学。这是由于，砂炒时同时以体积膨胀（外形鼓起）、浅褐黄色变深褐黄色的颜色转变、清脆的单声爆裂声、咖啡样的香味等形、色、声、味四方面来综合判断出锅时间，变化明显，完成时间把握准确，炒制品质不随操作人员的改变而改变。由此，将水浸天数、醋液浓度、醋煮时间作为正交实验的三个因素，可较全面合理地研究醋马钱子的炮制工艺。 　　在车间的实际生产工艺中，水浸天数的范围在6～10天，故水浸时间（d）初步确定在7、8、9三个水平上。醋液浓度（%）是购进白醋的原始浓度3.5%（即白醋总酸含量3.50 g・100mL-1），在节省原料及可行的考虑上确定醋液的浓度在1.5、2.5、3.5%三个水平上。醋煮时间车间的常用时长为3～6 h并为敞开式煮制，在预实验中发现，大烧杯中敞开式煮制1 h醋液已煮干；加盖煮制3 h可余刚覆盖过马钱子表明的醋液量。基于基本条件的限制，选择1、2、3作为醋煮时间（h）的三个水平。 　　综上，正交试验的因素和水平表如下表： 　　2.1.3样品制备及方法取干净透明的敞口玻璃瓶9个，分别编号①～⑨，每瓶加入已挑选的马钱子各100 g，分别加入没过马钱子表面约3 cm高的自来水中，放于阴凉干燥处，每天换水一次，分别浸泡7，8，9 d，达到不同的水浸天数后，取出马钱子，剥去皮毛，分别置1.5%、2.5%、3.5%不同浓度的6倍量醋中煮1，2，3 h，取出置50℃～60℃烘箱烘至八成干后，置锅中砂炒，于200℃～210℃砂温时投料，至体积膨胀，转成棕褐色并伴有爆裂声和香味时出锅，摊凉即成。得样品①～⑨号。 　　2.1.4结果与分析 　　2.1.4.1士的宁和马钱子碱含量测定（照《中国药典》2015年版第一部通则0512高效液相色谱法）色谱条件与系统适用性试验：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.01 mol・L-1庚烷磺酸钠与0.02 mol・L-1磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）（21：79）；检测波长：260 nm。按士的宁峰计算，其理论板数应高于或等于5000。 　　2.1.4.2对照品溶液的制备取6 mg士的宁对照品及5 mg马钱子碱对照品，精密称定后分别放入10 mL的容量瓶里，加入适量的三氯甲烷令溶解且加至刻度，振摇均匀。从两容量瓶中分别量取2 mL于同一10 mL的容量瓶里，加入甲醇至刻度，振摇均匀即得（每1 mL含士的宁0.12 mg，马钱子碱0.1 mg）。 　　2.1.4.3供试品溶液的制备把本品粉碎至可通过三号筛，取0.6 g左右，精密称重，放于带塞子的锥形瓶内，加入3 mL氢氧化钠试液。混摇均匀，静置30 min，精密加入20 mL的三氯甲烷，盖紧塞子并称重，于水浴锅中回流提取2 h，放至室温后称重并用三氯甲烷补重，振摇均匀，用分液漏斗分取三氯甲烷层，过滤时经过适量无水硫酸钠，取3 mL续滤液至10 mL容量瓶中，最后以甲醇定容，振摇均匀即得。 　　2.1.4.3测定法对照品以及供试品溶液被分别精密吸取10 μL，于液相色谱仪中进样，测定后即成。 　　2.1.4.4方法学考察 　　2.1.4.4.1线性关系考察取6 mg士的宁对照品、5 mg马钱子碱对照品，精密称定，分别放入10 mL容量瓶中，加适量的三氯甲烷使溶解，并稀释至刻度，振摇均匀。把二者并入同一50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，振摇均匀，即得每1 mL含士的宁0.12 mg，马钱子碱0.1 mg的混合对照品。从混合对照品中分别取10、5、2、1、0.5 mL至10 mL容量瓶中用甲醇稀释至刻度，配成5个士的宁浓度分别为0.120、0.060、0.024、0.012、0.006 mg・mL-1和马钱子碱浓度分别为0.100、0.05、0.02、0.010、0.005 mg・mL-1的对照品溶液，再分别按照确定的色谱条件，分别以峰面积（Y）对相应对照品的含量（X，μg）进行线性回归，回归方程为士的宁=34.876X-0.028，r=0.9999；马钱子碱=26.997X-0.0022，r=0.9999。 　　2.1.4.4.2精密度、重复性和稳定性试验取士的宁和马钱子碱混合对照品溶液，重复进样6次，每次10μL。混合对照品溶液中士的宁的平均峰面积为41.6142，RSD为0.22%；马钱子碱的平均峰面积为26.7880，RSD为0.26%。表明：进行含量测定的样品溶液，有良好的进样精密度。称取同一份供试品样品5份，各约0.6 g，精密称定，供试品溶液中士的宁的平均峰面积为47.5987，RSD为1.80%；马钱子碱的平均峰面积为18.8755，RSD为2.01%。表明：有良好的重复性。取同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12h测定，供试品溶液中士的宁平均峰面积为48.2981，RSD为0.21%；马钱子碱的平均峰面积为21.6697，RSD为0.25%。表明：在12h内，含量测定的样品溶液有良好的稳定性。