原花青素的含量测定方法
原花青素含量
思路:主要采用紫外分光光度法测定火棘果提取液中原花青素含量。通过在特定的波长或某一范围的波长下,测定待测物品的吸光度,近而对原花青素进行定量分析。
原花青素(procyanidins,简称PC)是植物中广泛存在的一类属于双黄酮衍生物的天然多化合物,原花青素具有极强的抗氧化特性,一般存在于植物的果实、种子、花和皮中,在葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、松树等植物中的含量都很丰富。在原花青素各种不同聚合体中以二聚体的抗氧化能力最强.原花青素具有多种生物活性,能防治多种疾病,具有高效、低毒、高生物利用率等特点,在植物中的主要作用是保护植物中易被氧化的成分,在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是V-E50 倍,并且还具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及美容等作用.
1. 实验原理
朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律,俗称光吸收定律,是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时,溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。
比耳的结论是,当用适当波长的单色光照射一固定液层厚度的均匀溶液时,A与C成正比,其数学表达式为:
(此即称为比耳定律,k称为比例系数)
当C采用摩尔浓度mol/L时,吸收定律表达为:
(ε称摩尔吸光系数,单位为)
2. 材料和仪器
主要试剂:火棘果提取液,原花青素标样,盐酸正丁醇溶液(量取95mL 正丁醇,加入5mL 浓盐酸,混匀)、NH4Fe(SO4)2、95% 乙醇。 主要仪器:UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。
3. 实验步骤
a. 标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.0504g,用95% 乙醇溶解并定容于100mL 容量瓶中,所得浓度为5.04mg/mL 作标样。吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL分别于25mL 具塞试管中,加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇溶液,盖塞,摇匀,于95℃的水
浴中加热反应40min 取出,于冷水中迅速冷却,溶液显红色,以0mL 溶液作为空白对照,于546nm 处测定其吸光度。采用最小二乘法作原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。
结果见表
b. 样品测定
分别精确吸取10mL 样品,用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。吸取上述样品待测液3mL 于25mL 具塞试管中,按标准曲线制作项下的操作步骤,依次分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液(注释:NH4Fe(SO4)2 溶液, 盐酸正丁醇溶液在这里都是分析纯。是大孔树脂对原花青素的纯化食盐中的分析纯部分)加热,测其吸光度。根据标准曲线计算出结果,按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。
4. 结果与分析