空气沉降菌检测方法
06-26
空气沉降菌检测方法
一、测定条件
实验动物设施环境空气中沉降菌的测定应在实验动物设施空调净化系统正常运行至少48h，经消毒灭菌后进行。
二、测点选择
每5㎡～10㎡设置1个测定点，将培养皿放于地面上。
三、测定方法
1. 试剂与仪器
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、双蒸水、电炉、石棉网、搪瓷缸、锥形瓶、培养皿、恒温培养箱、高压灭菌锅。
2. 测定方法
2.1 营养琼脂培养基的制备
⑴ 将琼脂20 g，蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，蒸馏水900 mL依次放入搪瓷缸中，在放有石棉网的电炉上小火加热溶解，然后加入氯化钠5 g，并用玻璃棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品安全溶解后，补足水分至1000 mL，停止加热，调整PH为7.6。趁热用三层纱布过滤，混匀后定量分装于锥形瓶内，然后置高压灭菌器内以121 ℃，高压灭菌20 min，取出后贮存于4 ℃冰箱中备用。
⑵ 将已灭菌的营养培养基，加热至完全融化，冷却至50 ℃左右，轻轻摇匀（勿使有气泡），立即倾注于灭菌平皿内（直径为90 mm），每皿15～20 mL。待琼脂凝固后，翻转平皿，放入37 ℃恒温培养箱中，经24 h无菌培养，无细菌生长，方可用于检测。
2.2 菌落测定方法
将无菌生长的培养皿置于实验动物所处环境的地面上，打开平皿盖，放置30 min，加盖，将平皿放于37 ℃恒温培养箱内，培养48 h后计算菌落数（个／皿）。
注：兔在屏障环境中，沉降菌最大平均浓度／（CFU／0.5h.φ90mm平皿）≦3。