植物化感作用本科毕业论文.doc

楚 雄 师 范 学 院

本 科 生 毕 业 论 文

题 目：火烧迹地厚皮香对三叶鬼针草、麻栎化感作用研究 专 业： 生物技术 学 号： [1**********] 系 （院）： 化学与生命科学系 学生姓名： 指导教师： 李天星 职称 副教授 论文字数： 7791 完成日期： 2013 年 5 月

教 务 处 印 制

目录

摘要 ………………………………………………………………………………………………………Ⅰ 关键词 ……………………………………………………………………………………………………Ⅰ Abstract …………………………………………………………………………………………………Ⅱ Key words ………………………………………………………………………………………………Ⅱ 前 言 ………………………………………………………………………………………………………1 1 材料与方法 ……………………………………………………………………………………………1 1.1 材料 …………………………………………………………………………………………………1 1.2 方法 …………………………………………………………………………………………………1 1.2.1植株水浸液的的制备………………………………………………………………………………2 1.2.2种子萌发及幼苗生长的测定………………………………………………………………………2 1.2.3脯氨酸含量的测定…………………………………………………………………………………2 1.2.4 MDA含量测定………………………………………………………………………………………2 1.2.5 POD活性的测定……………………………………………………………………………………3 1.2.6细胞形态的观察……………………………………………………………………………………3 1.2.7细胞形态的观察……………………………………………………………………………………3 2 结果与分析 ……………………………………………………………………………………………3 2.1厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草和麻栎种子萌发率的影响…………………………………………3 2.2厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草麻栎幼苗的株高影响………………………………………………4 2.3厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草和麻栎幼苗根长影响………………………………………………4 2.4厚皮香叶水浸液对三叶鬼针草植株脯氨酸含量影响………………………………………………5 2.5厚皮香水浸液浓度对三叶鬼针草和麻栎MDA影响……………………………………………………5 2.6厚皮香水浸液浓度对三叶鬼针草和麻栎POD影响……………………………………………………6 2.7三叶鬼针草和麻栎细胞显微形态观察…………………………………………………………………6 3 结论与讨论 ……………………………………………………………………………………………8 参考文献 …………………………………………………………………………………………………9 附录 ………………………………………………………………………………………………………10 致谢 ………………………………………………………………………………………………………32

火烧迹地厚皮香对三叶鬼针草、麻栎化感作用研究

摘要：为探究火烧迹地优势物种的化感作用机理，以火烧迹地厚皮香（Ternstroemia gymnanthera

(Wight et Arn.)Sprague）、麻栎（Quercus acutissima Carruth）、三叶鬼针草（Biden pilosa L.）为材料。以厚皮香叶为供体，麻栎和三叶鬼针草为受体，以厚皮香叶水浸液来研究其对种子萌发作用机理。设置5个浓度梯度的水浸液以及各3组平行组。比较种子萌发率、苗高和根长、茎尖和根尖细胞显微观察，幼苗相关酶活性及含量的测定：包括过氧化物酶(POD)、丙二醛(MDA)、脯氨酸含量的测定。结果表明：厚皮香叶片浸提液能不同程度地降低了三叶鬼针草和麻栎种子发芽率、苗高和根长；尤其对三叶鬼针草的种子萌发和幼苗生长抑制作用显著；高浓度时抑制效果显著，较低浓度时，有微弱促进作用；受体植物麻栎、厚皮香的脯氨酸、MDA含量随浓度的升高表现为正相关，POD值在0.15 g/ml时显著升高。受体植物根尖和茎尖细胞随着水浸液浓度的升高染色体数目呈下降趋势。表明厚皮香厚皮对三叶鬼针草和麻栎存在化感作用，且对三叶鬼针草作用更为显著。

关键词：火烧迹地；化感作用；厚皮香；三叶鬼针草；麻栎；萌发率；酶活性；染色体；

Burned Ternstroemiaceae right Bidens, Quercus Allelopathy

Abstract：To explore the burned area of dominant species, Allelopathy Mechanism to fire, thick skin

fragrant trace (Ternstroemia gymnanthera (Wight et Arn.) Sprague), Quercus acutissima (Quercus acutissima Carruth), Bidens pilosa (Biden pilosa L.) as material. With muskmelon leaf as the donor, Quercus acutissima and Bidens pilosa as receptor, with water immersion thick-skinned leaves to study the mechanism of seed germination. 5 the concentration gradient of the water extract and the 3 groups of parallel group. Comparison of seed germination rate, seedling height and root length, shoot and root tip cell microscopic observation, determination of enzyme activity and content of seedlings: including peroxidase (POD), malondialdehyde (MDA), determination of proline content. The results show that: the thick leather leaf extract reduced the Bidens pilosa L. and Quercus acutissima seed germination rate, seedling height and root length; especially of Bidens pilosa Seeds Germination and seedlings growth significantly inhibited when the concentration is high; the inhibitory effect, low concentration, weak role; Quercus acutissima, receptor plants Ternstroemia proline, MDA content increased with concentration is positively related to performance, the POD values increased significantly at 0.15 g/ml. The receptor plant root and stem tip cells increased with the chromosome number of the concentration of the extracts showed a downward trend. That thick skin fragrant thick skin of Bidens pilosa and Quercus acutissima the allelopathic effects of Bidens pilosa L, and the effect is more significant.

Key words：Burned area; allelopathy; Ternstroemia; Bidens pilosa; Quercus acutissima; germination

rate; enzyme activity; chromosome;

火烧迹地厚皮香、三叶鬼针草、麻栎三者化感作用研究

前言

化感作用是森林生态系统中广泛存在的一种生态化学现象，是影响森林植物种群生长发育、结构功能乃至整个生态系统群落演替的重要因素[1]。火灾能改变生态群落的结构，火烧强度是山地格局变化的重要引致因子，随着火烧强度的增加，森林水文调节能力降低幅度越大，湿地面积增加越显著，而未火烧区则变化很微弱。森林水文调节能力的变化则直接影响到山地水分来源[3]；在林业科学研究及林业生产实践中，对于森林经营过程中出现的连栽障碍、指导森林更新和建植、地力衰退、“土壤中毒”、对农作物布局、果园经营等生产实践有广阔的开发和应用前景有重要的意义[4]。

麻栎(Quercus acutissima Carruth.)是栎属 (Quercus L．) 落叶乔木。麻栎喜欢在光线充足，土壤深厚的山坡地上生长，形成麻栎树林或与松树组成混合树林。它分布于我国北起辽宁南到云南，西到西藏东部的大部分地区。具有木材材质坚硬、纹理美观、耐腐耐水湿等优良性状，是珍贵的优良建筑材和家具材用材树种[5]。

厚皮香Ternstroemia gymnanthera (Wightet Arm.)Sprague.山茶科(Theaceae,Tea Family)厚皮香属常绿乔木，高达15米，枝条灰绿色，无毛。叶倒卵形至长圆形，长3—7厘米，宽2厚皮香(5张)—3厘米，顶端钝圆或短尖，基部楔形，全缘，表面绿色，背面淡绿色，中脉在表面下陷，侧脉不明显；叶柄长5—10毫米。花淡黄色，花柄长1—1．5厘米，稍下垂。果实圆球形，呈浆果状，干燥，径约1．5厘米，萼片宿存。 花期7—8月。目前有学者对其扦插繁殖及光照强度对其幼苗生长、种子特性与扦插繁殖、厚皮香植物群落特征及繁殖特性、厚皮香造林技术等繁殖方面进行了大量而细致的研究[6-7]。

三叶鬼针草(Biden pilosa L.)为双子叶植物纲菊目菊科鬼针草属，一年生草本植物三叶鬼针草种子在 15～30℃恒温条件下萌发率均达到 80%以上，而且发芽快速而整齐，说明三叶鬼针草种子萌发的温度范围很宽，温度是影响三叶鬼针草种子萌发的重要生态因子。三叶鬼针草种子具有较好的初始萌发能力，无需经过休眠，且不需经过任何特殊处理就能快速而整齐的萌发。目前对三叶鬼针草研究较多主要是遮光对三叶鬼针草(Bidens pilosa)光合参数影响、环境保护方面对金属富集、干旱胁迫、水提物对其他植物种子萌发影响以及三叶鬼针草中黄酮甙对烟草花叶病毒的抑制作用等，但很少有学者研究三叶鬼针草和木本植物化感作用的研究[8-9]。

对厚皮香、三叶鬼针草、麻栎间的化感作用和机理研究有重要的意义，有助于我们更加合理地理解和解释火灾后的优势物种现象，对森林的恢复重建工作提供一定的理论依据[10]。

1．材料与方法

1.1 材料

于2012年10月在楚雄市西山公园（北纬N25°01′56.58″东经E101°32′7.31″海拔：1833.82米 ）火烧迹地收集麻栎(Quercus acutissima Carruth.)、三叶鬼针草(Biden pilosa L.)、厚皮香Ternstroemia gymnanthera (Wightet Arm.)Sprague.成熟饱满的种子备用并收集三种植物的叶片及根部制作水浸液备用。

1.2 方法

1.2.1 植株水浸液的的制备

将采集来的厚皮香叶片、根在室温条件下阴干并打磨成粉，分别取120 g、90 g、60 g、30 g、15 g，各加300 mL的蒸馏水恒温25℃泡48 h，用滤纸双重过滤后得到植株叶和根浸提液，浓度分别为0.40g／mL、0.30 g／mL 、0.20 g／mL、0.10 g／mL、0.05 g／mL，静置备用

1.2.2 种子萌发及幼苗生长的测定

挑选均匀饱满、大小一致的麻栎、厚皮香种子，用3%的双氧水消毒30分钟，然后用蒸馏水冲洗干净。用规格10*15 cm营养袋装土培养，每组组设计五个浓度梯度，每个浓度设计3袋平行组，对照组5盆，每盆放置6粒麻栎种子。每天观察麻栎和厚皮香种子的萌发（胚根或胚轴破皮1～2mm时为萌发）情况，第7天完成统计，计算发芽率（GR）。计算公式如下：

GR=（发芽种子数/供试种子数）×100%

10天后统计幼苗的苗高、苗鲜重、苗干重、根干重、根鲜重。 分别计算发芽率、苗高、苗鲜重、苗干重、根干重、根鲜重的化感效应指数（RI）和综合化感效应指数（SE）。计算公式如下： 当T>=C时， RI=1-C/T 当T

C为对照值，T为处理值。RI>0为促进作用，RI

1.2.3 脯氨酸含量的测定

[11]

取地上部(芽鞘和叶子) 0. 5 g, 用3 % 磺基水杨酸5mL 研磨提取, 匀浆移至离心管中, 在沸水浴中提取10 min, 冷却后, 3000 r/ min 离心10 min,取上清液待测；制作标准曲线 100 μg/ m L 脯氨酸配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 μg/mL 的标准溶液。取标准溶液各2 mL, 加2 mL 3 % 磺基水杨酸, 2mL冰醋酸和4 mL 2.5 % 酸性茚三酮试剂于具塞试管中, 置沸水浴中显色1h ,冷却后加入4 mL 甲苯盖好盖子于旋涡混合仪上振0.5 min, 静置分层, 吸取红色甲苯相, 于波长520nm 测定OD 值,以OD值为纵坐标, 脯氨酸浓度(μg/ mL) 为横坐标绘制标准曲线。④各取2 mL 两种上清液, 分别加入2 mL 蒸馏水, 2 mL 冰醋酸和4 mL 2.5% 酸性茚三酮试剂, 与上述制作标准曲线一样进行显色, 萃取和比色, 最后从标准曲线查得脯氨酸含量。计算公式为：脯氨酸含量（ug/g））=[X×5/2]/样重（g）。 1.2.4 MDA含量测定

[11]

取植株上一定叶位的叶片，剪成小段，混匀,称取0.3g放入冰浴的砚钵中，加少许石英砂和2ml0.05mol/LPH为7.8的磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用2-3 ml0.05mol/L磷酸缓冲液分两次冲洗，合并提取液；在提取液中加入5 ml 0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。将试管放入沸水中煮沸10分钟（自试管内溶液中出现小气泡开始计时），到时间后立即将试管取出并放入冷水浴中；带试管内溶液冷却后，3000 g离心15min，取上清液并量其体积。以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白测532nm、600nm、450nm处的吸光度；结果计算:MDA（mmol.g-1FW）=〔6.452*（A652-A600）-0.559*A450〕*Vt/Vs*FW；[式中，Vt:提取液总体积（ml），Vs：测定用提取液体积（ml），FW：样品鲜重（g）]。 1.2.5 POD活性的测定

[12]

称取植物材料1 g, 加20 m mol/ L KH2PO4 5 mL, 于研钵中研磨成匀浆, 以4000 r/min 离心15 min, 收集上清液保存在冷处, 所得残渣再用5 mL KH2PO4 溶液提取一次, 合并两次上清液；取光径1 cm 比色杯2只, 于1只中加入反应混合液3 mL, KH2PO4 1mL, 作为校零对照, 另1只中加入反应混合液3 mL, 上述酶液1 mL(如酶活性过高可适当稀释)，立即开启秒表计时，于分光光度计470 nm波长下测量OD 值, 每隔1min 读数一次。以每分钟OD 变化值表示酶活性大小, 即以ΔOD470/min/mg 蛋白质(或鲜重g) 表示。蛋白质含量测定按Folin 法进行或用考马斯亮蓝法测定。

1.2.6 细胞形态的观察

制作不同浓度处理的三叶鬼针草和麻栎植株根和茎尖显微切片，探索其细胞形态的变化。

1.2.7数据处理

采用Excel、SPSS Statistics 18.0进行分析与整理。

2 结果与分析

2.1 厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草和麻栎种子萌发率的影响

从表1可以看出，厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草种子萌发的影响表现为抑制，随着厚皮香叶浸提液浓度的升高，种子的萌发率降低。把麻栎种子的萌发率进行单因素方差分析，P≈0.000，说明厚皮香叶的浸提液对麻栎种子萌发的影响达到极显著水平。0.15g/ml的厚皮香叶浸提液与对照组差异显著（P=0.45），其它浓度下，差异达到极显著水平（附录1），说明厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草种子萌发具有显著的抑制作用。

随着厚皮香叶浸提液浓度的升高，三叶鬼针草种子萌发率受到影响，对麻栎种子萌发的抑制作用增强。把萌发率的化感指数进行单因素方差分析，P≈0.000，说明各浓度间的化感效应指数差异达到极显著水平。

综上所述，厚皮香叶浸液对三叶鬼针草和麻栎种子萌发率作用明显，可能作为化感作用的一项生理指标。

表1 厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草和麻栎种子萌发及幼苗生长的影响

Table .1 thick skin Geranium effects of extracts on Germination and seedling growth of Bidens pilosa and

seeds of Quercus acutissima

水浸液浓度 (g/ml)

受体植物

萌发率 （%）

株高 （cm）

根长 （cm）

注：* 表示实验组与对照组的差异显著性。* 表示差异显著。** 表示差异极显著。P=0.05。下表同。

2.2 厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草麻栎幼苗的株高影响

附录1可以看出，厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗的苗高的影响表现为抑制，随着厚皮香叶浸提液浓度的升高，幼苗的株高降低。把麻栎幼苗的株高进行单因素方差分析，P≈0.000，说明各浓度间的株高差异极显著。0.05g/ml处理的实验组的幼苗株高与对照组的幼苗株高差异不显著（P=0.85）；其它浓度下的幼苗的株高与对照组的差异极显著（P≈0.000）。说明低浓度下的厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗的株高没有明显影响，高浓度下的厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗的株高影响显著。

随着厚皮香叶浸提液浓度的升高，麻栎幼苗株高的化感指数增大，对麻栎幼苗株高的抑制作用增强。把株高的化感指数进行单因素方差分析，P≈0.000，说明各浓度间的化感效应指数差异达到极显著水平。0.05 g/ml（P=0.200）、0.10 g/ml(P=0.079)、0.15 g/ml(P=0.057)浓度下的实验组的幼苗株高与对照组差异不显著,0.20 g/ml（P=0.010）、0.25 g/ml(P=0.027)的株高化感效应与对照组的差异显著,说明低浓度的厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗株高的化感指数影响不显著，高浓度下影响显著。这表明幼苗株高可能不是衡量化感作用的敏感指标。

2.3 厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草和麻栎幼苗根长影响

从附录5可以看出，厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗根长表现为抑制，随着厚皮香叶浸提液浓度的升高，幼苗根长降低。把麻栎幼苗根长进行单因素方差分析，P≈0.000，说明厚皮香叶的浸提液对麻栎幼苗根长的影响达到极显著水平。各个实验组幼苗根长与对照组差异极显著（P≈0.000），说明厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗根长具有极显著的抑制作用。

从附录6可以看出，随着厚皮香叶浸提液浓度的升高，三叶鬼针草幼苗根长的化感指数增大，对三叶鬼针草幼苗根长的抑制作用增强。把根长的化感指数进行单因素方差分析，P≈0.000，说明各浓度间的化感效应指数差异达到极显著水平。所有实验组的根长的化感指数都与对照组的化感指数差异极显著（P≈0.000），说明各浓度的厚皮香叶浸提液对麻栎幼苗根长的化感效应极显著。这表明幼苗根长是衡量化感作用的敏感指标。

2.4 厚皮香叶水浸液对三叶鬼针草植株脯氨酸含量影响

况下的数十至数百倍[13-15]，一般来讲，量与植物抗逆性呈正相关。由图1分析可知，同浓度处理下，的，含量均随着浓度的增大不同程度的升高。草和麻栎脯氨酸含量均高于对照组，0.05、0.15、0.20、0.25量分 别增加了1.02倍、1.23倍、1.36倍、1.48麻栎脯氨酸含量增加了1.23倍、1.45倍、 1.56倍、1.69倍、1.86倍.对麻栎的影响大于对三叶鬼针草。脯氨酸含量增加幅度高于三叶鬼针草的。明麻栎抗逆行强于三叶鬼针草。

2.5 麻栎MDA影响

植物处在在逆境条件下，化作用，丙二醛(MDA)是其产物之一，化感等逆境伤害的指标[16]。标由图2可见，三叶鬼针草和麻栎的丙二醛含量均呈升高—降低—升高的趋势，在水浸液浓度0.15g/ml时达到

一个高峰，说明膜脂过氧化程度加大，即细胞膜受到了损害，但随后出现了回落，说明植物体内的防御体系起到了一定的作用，使细胞膜伤害程度降低[17-19]。随水浸液浓度的增加，丙二醛的量达到了一定的累积，麻栎在0.15 g/ml、0.20 g/ml处理时的MDA含量分别是相应对照组的1.072倍、1.714倍；而三叶鬼针草在0.15 g/ml、0.20 g/ml处理时的MDA含量分别是对照组的0.778倍、0.823倍。说明相同水浸液浓度下，麻栎比三叶鬼针草叶片的细胞膜透性增加幅度更大, 膜脂过氧化水平升高, 膜结构受损伤程度相对较大, 细胞内物质的外渗加重, 其受到影响较大，由此可知，随着水浸液浓度增大，麻栎的受害程度较大。

2.6 厚皮香水浸液浓度对三叶鬼针草和麻栎POD影响

POD是属于抗氧化酶 能清除植物在逆

境中产生的超氧化物自由基 保护植物免遭氧化逆境伤害植是物体内的一种保护酶类，是与衰老有关的一种酶，在植物体内的作用具有非专一性，它即与膜脂过氧化有关，又可以清除细胞体产生较少的O2-,与植物的抗逆能力密切相关[20]。在不同浓度水浸液处理的两种受体植物POD活性均呈先升高后降低的相似趋势，其中在0.15 g/ml达到峰值，随后开始下降，最终低于对照组，说明在一定的浓度处理下，植物细胞忍耐活性氧的水平可能存在一个阀值，超过了这个阀值，就会导致植物受到极大的伤害[21-26]。随着水浸液浓度的加大，在0.15 g/ml、

和0.20 g/ml三叶鬼针草的POD 活性分别是相应对照的0.574、0.344倍，麻栎的POD 活性分别是相应对照的0.817、0.465倍。表明相同浓度下麻栎的POD 活性明显高于三叶鬼针草，且降幅较小，对O2- 、H2O2 等活性氧的清除能力较强, 其抗旱性相对较强[27]。同时表明厚皮香的水浸液对麻栎的化感作用更为显著。

2.7 三叶鬼针草和麻栎细胞显微形态观察

将不同浓度厚皮香叶水浸浇灌处理的三叶鬼针草茎尖做显微压片观察，显微镜放大10*40倍，其

结果如以下图片显示，随着水浸液浓度的升高染色体数目减少。

④ ⑤ ⑥

Ck 0.05 g/ml 0.10g/ml

0.15g/ml 0.20g/ml 0.25g/ml

将不同浓度厚皮香叶水浸浇灌处理的麻栎茎尖做显微压片观察，显微镜放大10*40倍，其结果下图显示，随着水浸液浓度的升高相同视野中畸变细胞逐渐增多，许多细胞出现无核状态，仅有可见细胞壁结构

ck 0.05 g/ml 0.10 g/ml

ck 0.20 g/ml 0.25 g/ml

将不同浓度厚皮香叶水浸浇灌处理的麻栎根尖做显微压片观察，显微镜放大10*40倍，其结果如以下图片显示，随着水浸液浓度的升高染色体数目减少。

Ck 0.01 g/ml

0.15g/ml

0.15 g/ml

0.20 g/ml

0.25 g/ml 0.15 g/ml

将不同浓度厚皮香叶水浸浇灌处理的三叶鬼针草根尖做显微压片观察，显微镜放大10*40倍，其结果如以下图片显示，随着水浸液浓度的升高染色体数目减少。不规则细胞数目呈上升趋势，

就上面图综合来看，0.25水浸液浓度处理的三叶鬼针草茎尖细胞发生畸变，体积增大，与其他组差异较为明显，染色体随着水浸液浓度的升高呈现下降趋势。而根尖切片显示细胞形态无明显差异，但染色体数目呈下降趋势；麻栎茎尖切片显示出细胞形态一致，但其染色体数目整体较少，根尖切片显示，水浸液浓度由低到高处理的植株让色体数目呈下降的趋势。由于本实验切片数目的因素此结果可能存在一定偶然性。

3.结论与讨论

实验结果表明：厚皮香叶浸提对三叶鬼针草和麻栎均表现出化感作用。不同浓度的厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草和麻栎种子萌发及幼苗生长的影响程度不同。从总体趋势来看，化感效应是随着厚皮香叶浸提液浓度升高而增大。绝大多数实验组测定参数都与对照组的差异性达到了极显著水平。厚皮香叶的不同浓度的浸提液对三叶鬼针草和麻栎的综合化感效应都表现为抑制并达到了显著水平，我们可以初步认为厚皮香叶浸提液对大麦种子萌发及幼苗生长具有显著的抑制性。

本实验就厚皮香对三叶鬼针草和麻栎种子萌发及幼苗生长及细胞形态做了一个初步的探究，旨在探索化感作用对植株生理生化指标的影响。数据显示当厚皮香叶浸液浓度为0.10 g/ml-0.15g /ml是对三叶鬼针草和麻栎种子的萌发影响效果显著，其对株高和根长的影响也达到了最大值；受体植物体内相关酶活性及含量也发生较大变化，其中在相同浓度处理下，麻栎的脯氨酸含量高于三叶鬼针草的，在不同浓度的厚皮香叶浸液浓度处理后脯氨酸含量均随着浓度的增大不同程度的升高。三叶鬼针草和麻栎脯氨酸含量均高于对照组，0.05、0.10、0.15、0.20、0.25浓度处理下三叶鬼针草脯氨酸含量分 别增加了1.02倍、1.23倍、1.36倍、1.48倍。麻栎脯氨酸含量增加了1.23倍、1.45倍、1.56倍、1.69倍、1.86倍.表明厚皮香水浸液浓度对麻栎的影响大于对三叶鬼针草。MDA、POD含量均在0.10-0.15 g/ml 达到最大值。和麻栎相比三叶鬼针草体内的相关保护性酶活性均低于麻栎，说明在以厚皮香叶浸叶浇灌的环境中麻栎更占优势。细胞形态来看三叶鬼针草茎尖细胞发畸变，而在麻栎细胞中尚未发现。初步比较，厚皮香叶浸液均对三叶鬼针草和麻栎表现出较强的化感作用，比较可知对三叶鬼针草的化感作用强于三叶鬼针草，这与火烧迹地调查结果麻栎的种群规模大于三叶鬼针草的种群规模相一致。

综上所述本论文从生理生化水平及细胞水平对化感作用进行初步系统的探究，从植物种子萌发率到体内酶的变化，到形态差异最后到细胞结构差异做了较为全面的探索。但还有许多不足之处如实验规模，植物的生化指标未能很好覆盖，对化感作用的解释还缺乏说服力，实验方案的系统性还有待于进一步的完善。

参考文献

[1] 杜明广, 李晓坤, 崔崧. 森林植物化感作用研究现状及发展方向. 林业勘查设计, 2009(1). [2] 李亮亮,李天来, 张恩平. 作物化感作用研究进展[J]. 安徽农业科学, 2007, 35(25): 7738–

7740.

[3] 徐震邦.主要伴生树种树叶对红松生长的影响[J].林业科学,1972(4): 357-360. [4] 张昌顺, 李昆.人工林地力的衰退与维护研究综述 [J].世界林业研究2005, 18(1). [5] 袁久志, 孙启时. 麻栎叶的化学成分研究.[J] 1990(1).

[6] 徐涛, 王跃华, 蒋连计.厚皮香植物的种子特性与扦插繁殖的初步研究《云南大学学报 (自然科

学版) 》.2004, (5).

[7] 孙晓萍, 陈丽庆. 日本厚皮香的扦插繁殖及光照强度对其幼苗生长的影响[J].2011(10)

[8] 王瑞龙, 韩萌, 梁笑婷, 宋圆圆, 苏贻娟, 曾任森. 三叶鬼针草生物量分配与化感作用对大气

温度升高的响应.《生态环境学报》. 2011(6).

[9] 王宁, 秦艳. AM真菌对宿主植物三叶鬼针草根系形态的影响. 《安徽农业科学》.2012 (1). [10] 董章杭 林文雄 作物化感作用研究现状及前景展望 中国生态农业学报2001, 3. 9(1).

[11] 张志良, 瞿伟菁, 李小方.植物生理学实验指导 第4版. 北京:高等教育出版社,2009: 208-209.

[12] 李 玲, 李娘辉, 蒋素梅等.植物生理学模块实验指导 [M].北京: 科学出版社. 2009: 80-83. [13] 潘瑞炽, 王小菁, 李娘辉, 等. 植物生理学[M]. 北京: 高等教育出版社. 2006:284-303. [14 林嵩, 翁伯琦. 外来植物化感作用研究综述[J]. 福建农业学报, 2005, 20(3): 202–210. [15] 须海. 植物化感作用研究中亟待解决的问题综述[J]. 农业科技通讯, 2008.

[16] 李寿田, 周健民, 王火焰, 等. 植物化感作用研究概况[J]. 中国生态农业学报, 2002, 10(4):

68–70.

[17] 邓麟, 曹金锁, 王秦虎, 等. 植物化感作用研究进展[J]. 陕西农业科学, 2007, 4: 81–83. [12] 张爽, 潘伟. 植物化感作用研究进展[J]. 现代化农业, 2006, 325(8): 16-17. [18] 柴强, 黄高宝. 植物化感作用的机理、影响因素及应用潜力[J]. 西北植物学报, 2003, 23(3):

509–515.

[19 杨娟, 殷全玉, 杨丙钊, 等. 植物化感作用研究进展[J]. 植物生理科学, 2007, 23(1): 68–

72.

[20] 吕品. 国内植物化感作用及其在农业和环境保护中的应用研究[J]. 安徽农学通报, 2009,

15(15): 29–34.

[21] 李寿田, 周健民, 王火焰, 等. 化感作用在杂草控制中的应用[J]. 中国生态农业学报, 2003,

11(1): 104–106.

[22] Callaway R M, Aschehoug E T. Invasive plants versus their new and old neighbors:a mechanism for

exotic invasion[J]. Science,2000(290): 521–523.

[23] 宋亮, 潘开文, 王进闯. 化感活性物质影响种子萌发作用机理的研究进展[J]. 世界科技研究

与发展, 2006, 28(4): 52–57.

[24] 江贵波, 曾任森. 化感物质及其收集方法综述[J]. 河南农业科学, 2006, 6: 24–27.

[25] 李惠敏, 汤冬娥, 杨柳叶, 等. 紫茎泽兰对10种植物的化感作用研究[J]. 安徽农业科学,

2010, 38(8): 4412–4413.

[26] Anderson RC, Loucks OL. Osmotic pressure influence in germination test for antibiosis[J]. Science,

1966. 152: 771–773.

[27] 沈慧敏, 郭鸿儒, 黄高宝. 不同植物对小麦、黄瓜和萝卜幼苗化感作用潜力的初步评价[J].

应用生态学报, 2005, 16(4): 740–743.

附录：

附录1 厚皮香叶水浸液对三叶鬼针草种子萌发的影响

方差齐性检验

三叶鬼针草种子萌发率 Levene 统计量

5.082

df1

5

df2

12

显著性

.010

ANOVA

0.05 0.10 0.15 0.20

*. 均值差的显著性水平为 0.05。

-.15667* -.16000* -.09000* .31333*

.03255 .03255

.03255 .03255

.000 .000 .017 .000

-.2276 -.2309 -.1609 .2424

-.0858 -.0891 -.0191 .3842

均值图

附录2 厚皮香叶浸液对麻栎种子萌发率影响

方差齐性检验

麻栎种子萌发率 Levene 统计量

3.349

df1

5

df2

12

显著性

.040

多重比较

麻栎种子萌发率 LSD

均值图

楚雄师范学院本科论文（设计）

附录3厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草株高的影响

16

楚雄师范学院本科论文（设计）

17

方差齐性检验

三叶鬼针草株高cm Levene 统计量

2.526

df1

5

df2

469

显著性

.010

18

19

楚雄师范学院本科论文（设计）

附录4 厚皮香叶浸提液对麻栎株高的影响

20

方差齐性检验

麻栎株高cm Levene 统计量

2.694

df1

5

df2

462

显著性

.074

21

22

23

楚雄师范学院本科论文（设计）

附录5 厚皮香叶浸提液对三叶鬼针草根长的影响

24

方差齐性检验

三叶鬼针草根长cm Levene 统计量

3.445

df1

5

df2

511

显著性

.037

25

26

楚雄师范学院本科论文（设计）

楚雄师范学院本科论文（设计）

附录6厚皮香叶浸液对麻栎根长的影响

28

方差齐性检验

麻栎根长cm Levene 统计量

7.180

df1

5

df2

474

显著性

.047

均值图

1 脯氨酸标准曲线的绘制

⑴ 在分析天平上精确称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。

⑵ 系列脯氨酸浓度的配制取6个50 mL容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0 mL，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ mL。 ⑶ 取6支试管，分别吸取2 mL系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。

⑷ 冷却后各试管准确加入4 mL甲苯，振荡30 S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。 ⑸ 用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520 nm波长处进行比色。

⑹ 标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2 mL）。

本试验绘制的脯氨酸标准曲线如下：

图4 脯氨酸标准曲线 Fig.4The proline Standard curve

致谢

此篇论文得以完成，离不开很多人的帮助。首先要感谢我的指导老师李天星老师的细心指导。李老师渊博的专业知识、严谨细致的治学态度和宽容耐心的指导使我获益匪浅。在此，谨向李老师表示我崇高的敬意和衷心的感谢。同时还要感谢邱璐老师对统计分析知识传授、范树国老师为实验提供试剂帮助以及各位帮助过我的同学，请接受我最诚挚的谢意！