硅胶柱层析法分离纯化甘露低聚糖
食品工业科技 ScienceandTechnologyofFoodIndustry
工艺技术
硅胶柱层析法分离纯化甘露低聚糖
许牡丹,汤木红,王小燕
(陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西西安710021)
摘 要:采用硅胶柱层析法分离纯化甘露低聚糖,由实验得到最佳分离条件为:进样量为10mL,柱高为600mm,流速为1mL/min,温度为60℃,在此条件下甘露低聚糖的纯度为71134%。关键词:硅胶柱层析,分离纯化,甘露低聚糖
Separationtioridesby
satography
Mu-dan,TANGMu-hong,WANGXiao-yan
(CollegeofLifeScience&Engineering,ShaanxiUniversityofScience&Technology,Xi’an710021,China)
Abstract:Theseparationandpurificationofmanno-oligosaccharideswasstudiedbysilicagelcolumnchromatography1Theoptimalseparationconditionwasasfollows:theinjectionvolumewas10mL,columnofresinwas600mm,thevelocityofflowwas1mL/min,temperaturewas60℃,throughthismeasure,thepurityofglucomannan-oligosaccharideswas71134%1
Keywords:silicagelcolumnchromatography;separationandpurification;manno-oligosaccharides
中图分类号:TS201123 文献标识码:B 文章编号:1002-0306(2008)09-0188-03 甘露低聚糖(manno-oligosaccharides)又称甘露
寡聚糖,是唯一能结合肠道中外源性病菌的新型功能性低聚糖。它具有如下生理功能:优化动物胃肠道微生态环境,预防胃肠道疾病;调节免疫防御机制,增强免疫力;发挥多样生物活性,吸附霉菌毒[1]
素。目前甘露低聚糖主要采用酶法制备,在酶解液中除了甘露低聚糖外还含有单双糖和多糖,甘露低聚糖的含量不高,所以必须进行分离纯化。本文研究了硅胶柱层析分离甘露低聚糖的方法。
测各组分含量。
+
2 结果与讨论
211 柱高对分离纯化效果的影响
取一定量的甘露低聚糖浆,在一定洗脱流速和温度下,选择不同柱高进行洗脱,结果如图1～图3和表1所示
。
1 材料与方法
111 材料与设备
硅胶 青岛海浪硅胶厂;正丙醇。
带有夹套的玻璃管 自行设计,长80cm,直径210cm(内径)。
112 实验方法
取自制的甘露低聚糖糖浆,采用湿法装柱,洗脱剂为正丙醇∶水=85∶15,按照10mL/管收集洗脱液,同时取每管洗脱液在硅胶板上点样,用苯胺-二苯胺显色剂显色,对含糖的洗脱液进行浓缩,从中取样检
收稿日期:2007-11-12
作者简介:许牡丹(1963-),女,教授,研究方向:食品生物技术及分析
检测。
基金项目:自然科学基础研究计划项目(2006B19),陕西省科技厅科技
攻关项目(2007K07-25);陕西省教育厅专项科研计划项目
(07Jk197)。
柱高400mm时,三个峰重叠严重,分离效果不好;柱高600mm和800mm时,各组分基本分开。随
18
82008年第09期
工艺技术
Vol.29,No.09,2008 食品工业科技
表2 洗脱流速对分离纯化效果的影响
流速
(mL/min)
015110115
总糖回收率
(%)
9495149616
峰值处甘露
低聚糖/此处总糖(%)
5015660
19856197
峰值处甘露
低聚糖/总回收低聚糖(%)
[**************]
213 进料量对分离纯化效果的影响
图3 柱高800mm分离曲线表1 柱高对分离纯化效果的影响
柱高总糖回收率
(mm)(%)
400600800
97941689
取甘露低聚糖浆,在柱高为600mm、流速为1mL/min和一定温度的条件下,选择不同进样量进行洗脱,结果如图7～图93。
峰值处甘露
低聚糖/此处总糖(%)
4818160
峰值处甘露
低聚糖/总回收低聚糖(%)
130,,但总糖回收率
降低,分离时间加长,所需洗脱液增多。综合比较总糖回收率、峰值处甘露低聚糖占此处总糖和占总低聚糖的质量分数,确定600mm为最佳柱高。
212 洗脱流速对分离纯化效果的影响
取甘露低聚糖浆,在柱高为600mm和一定温度条件下,选择不同流速进行洗脱,结果如图4～图6和表2所示。
表3 进料量对分离纯化效果的影响
进样量(mL)
51015
总糖回收率
(%)
[1**********]8
峰值处甘露
低聚糖/此处总糖(%)
[**************]
峰值处甘露
低聚糖/总回收低聚糖(%)
[**************]
进样量为15mL时,三个峰基本重叠,分离效果不好;进样量为5mL
和10mL时,三个峰基本分开。进样量过低会降低分离纯化效率,因此最佳进样量
为10mL。
214 温度对分离纯化效果的影响
取甘露低聚糖浆10mL,在柱高为600mm,流速为1mL/min的条件下,选择不同温度进行洗脱,结果
流速为015mL/min和115mL/min时,三个峰重叠
多,不能很好地分离低聚糖,故采用1mL/min作为实验的基本流速。
如图10～图12和表4所示。
由图可知,不同温度下,分离曲线差别不大。综合考虑总糖回收率、峰值处甘露低聚糖占此处总糖
2008年第09期
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图12 70℃,。
;,洗脱剂的蒸发。
结论
通过实验得知,最佳分离条件为:进样量为10mL,柱高为600mm,流速为1mL/min,温度为60℃。此时总糖回收率为9611%,甘露低聚糖峰值处低聚糖占此处总糖的71134%,占总低聚糖的26159%。
表4 温度对分离纯化效果的影响
温度
(℃)
5060总糖回收率
(%)
9516096110峰值处甘露
低聚糖/此处()6516471134峰值处甘露
低聚糖/总回收()
2411526159
参考文献:
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学版,2002,19(3):35～371
(上接第187页)
本研究实现了实验室规模的固定化酶连续生产
低乳糖乳,对于工业化应用,还需要进行进一步研究,充分考虑工业化的放大过程及各个环节中可能遇到的各种问题。
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02008年第09
期
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