银杏叶提取物精制工艺的研究
第25卷第2期 郑州工程学院学报 Vol.25,No.22004年6月 JournalofZhengzhouInstituteofTechnology Jun.2004
文章编号:1671-1629(2004)02-0075-03
银杏叶提取物精制工艺的研究
高 琳,孟春丽,雷天乾
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(11河南纺织高等专科学校,河南郑州450007;2.郑州市医药科技开发中心,河南郑州450066)摘要:研究了溶剂精制银杏叶粗提取物的工艺.粗提物经溶剂溶解精制,总黄酮含量达24%,黄酮收率>95%,指标接近超滤除杂、树脂吸附制备提取物的工艺.关键词:银杏叶;黄酮;精制;超滤中图分类号:TS20112 文献标识码:B 银杏黄酮是银杏叶提取物中的主要活性成分之一,在抗氧化及治疗心脑血管疾病等方面具有独特的疗效.银杏叶提取物的生产工艺主要有丙酮溶剂提取和乙醇提取、树脂分离两种方法.我国主要采用乙醇提取、树脂分离法生产提取物,工艺流程为:乙醇水溶液提取、树脂吸附、乙醇水溶液单次或分级洗脱、浓缩干燥得产品.但大多企业生产条件较差,控制手段落后,经常出现产品质量不稳定或收率低的现象.近年来,在该工艺路线的基础上,以提高产品质量及收率进行了多种方法的研究,主要有:(1)在提取液中加入适当的絮凝剂[1,2];(2)使用超滤对提取液净化[3,4];(3)超临界CO2精制粗提取物
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Lm径向加压柱);超滤器(美国Milipore公司,卷式膜,截流相对分子质量3万).
槲皮素(中国药品生物制品检定所),山萘酚、异鼠李素(Sigma公司),DM130树脂(山东齐鲁抗生素股份有限公司);银杏叶(河南省银杏科技开发中心提供,经高效液相色谱测定总黄酮含量为1.02%);95%乙醇(食用级).溶剂RS-A、RS-B(购于河南省医药供应公司),其它试剂均为分析纯.
2 实验方法
2.1 总黄酮含量测定方法
参照文献[7],高效液相色谱法测定.色谱条件:甲醇-0.4%磷酸溶液(55B45)为流动相,流速:1.0mL/min,进样量:10LL,检测波长:360nm,柱温:25e.外标法则定.
银杏叶样品的制备:准确称取银杏叶1.5g,甲醇索氏提取8h,60e浓缩至15mL,加入1.5mol/L盐酸20mL,摇匀,回流20min,冷却后转入50mL容量瓶中,用甲醇定容,备用.
银杏叶提取物样品的制备:准确称取银杏叶提取物0.1g,加甲醇20mL使其完全溶解,加入1.5mol/L盐酸20mL,摇匀,回流120min,冷却,转入50mL容量瓶中,用甲醇定容,过滤备用.2.2 精制工艺
提取液的制备:按文献[4]的工艺条件,取适量的银杏叶,将其切成条状,用银杏叶重8倍量的70%(V/V)的乙醇回流提取两次,第1次3h,第2次2h,趁热过滤,合并提取液,回收乙醇,水溶液加10倍的无盐水,管式离心机离心除杂后备用;(4)研制吸附和选择性
好、效率高的新型树脂.(1)和(2)以除去大分子
的单宁、鞣质、蛋白质和多糖等杂质为目的.其中(1)、(2)、(3)的研究工作都取得了较好的效果,但需要增加较多的工艺步骤或加大设备投资;研制生产选择性好、效率高的树脂尚需要较长的时间,企业同样需要较完善的分析条件与之相匹配.为此,作者在研究超滤除杂净化提取液、树脂吸附制备银杏叶提取物的基础上,对溶剂精制粗提取物工艺进行了研究.
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1 仪器和试剂
液相色谱仪(美国Waters公司,600E型泵系统,996型二极管阵列检测器,[email protected]、5
收稿日期:2004-02-28
作者简介:高琳(1962-),女,河南泌阳县人,副教授,从事有机化.
郑州工程学院学报 76率为82%).
2.2.1 树脂吸附单次洗脱、溶剂精制工艺提取液经DM130树脂柱吸附,用无盐水冲洗至流出液澄清,再用70%乙醇洗脱,收集流出液至无色,流出液经减压回收乙醇,60e减压浓缩至膏状、真空干燥24h,粉碎得粗提取物(黄酮总收率为78.02%).粗提取物等分两份,分别加到RS-A和RS-B溶剂中(液固质量比10B1),70e充分搅拌溶解15min,过滤,滤液经减压浓缩回收溶剂,60e真空干燥3h,粉碎得银杏叶提取物,残杂60e真空干燥3h取样分析,结果见表1.
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第25卷
2.2.2 膜超滤法制备银杏叶提取物
提取液经超滤器超滤,滤出液(或透过液)直接用DM-130树脂柱吸附,截留部分(浓缩液)返回料液罐中,当截留部分体积达起始料液体积的1/10时,加5倍的无盐水混匀,继续超滤,当截留部分体积再达原体积的1/10时,完成超滤.用少量的无盐水冲洗柱,用70%乙醇洗脱,收集流出液至无色,减压回收乙醇,60e浓缩、真空干燥24h,粉碎制得提取物,测定黄酮含量;取一定量的截留液,60e浓缩、真空干燥24h,测定残渣中总黄酮的含量,结果见表2.
表1 银杏叶粗提取物溶剂精制结果
粗提取物产品重/g47.2046.9037.0075.0042.60平均
注:-表示用HPLC未检测出
黄酮含量/%17.2118.0219.3121.8520.30
/g30.0529.3027.2465.47产品重
RS-A溶剂精制黄酮含量/%26.4027.6225.7024.7026.10
精制收率/%97.6695.7697.9898.6897.52
残杂重及黄酮含量/g /%15.316.111.46.80
0.06---32.77
25.7427.32
97.5497.35
9.0
-1)
RS-B溶剂精制
产品重/g29.0027.8026.00
黄酮含量/%27.0329.6026.93
精制收率/%96.5097.3798.00
残杂重及黄酮含量/g /%13.915.78.9
---
杂质的主要成分为原花青素、相对分子质量量较
3 结果与讨论
3.1 溶剂精制
表1结果说明,用10倍量的RS-A或RS-B溶剂对银杏叶粗提取物进行一次溶解精制,可使提
取物中平均黄酮含量>26%,溶剂精制总黄酮收率97.44(97.52%和97.35%的平均值),银杏叶提取、溶剂精制工艺总收率为75.96%(77.96%@97.44%).所用溶剂均为无毒易得,在精制的过程中,溶液易过滤,溶剂易回收再利用,回收溶剂后产品可直接干燥,产品外观与粗提物相比色浅、鲜艳、疏松易粉碎;滤渣疏松不粘,干燥后为深棕黄色疏松颗粒粉末,基本不含银杏黄酮.笔者认为,
大的鞣质、蛋白质、多糖类等物质.这些杂质极性强,弱极性大孔径DM-130树脂对其有较强吸附能力,且在吸附树脂柱中所行的路径较长,用无盐水在较短时间内难以洗脱出来,易混入洗脱液中.杂质在洗脱液浓缩及粗提物干燥过程中可进一步聚合、变性成为不溶于RS-A和RS-B溶剂的大分子化合物,而银杏黄酮和银杏内酯易溶于其中,所以容易将杂质与黄酮分离.产品及滤渣的测试结果表明:溶剂精制过程几乎可以使黄酮定量分离.比较两种溶剂精制的结果,选用RS-A更优越一些.
3.2 超滤工艺精制
表2 膜超滤除杂制备银杏叶提取物结果
银杏叶
银杏叶量
/g20502050
2050平均
提取液中黄酮量/g1)
17.1517.1517.15
提取物重
/g60.9767.4666.48
黄酮含量/%26.7524.1025.1025.32
透过液黄酮透过率
/%95.1094.8097.3095.73
黄酮总收率
/%77.9877.7379.7978.50
残渣重/g37.2046.0043.50
浓缩液黄酮含量/%2.201.901.561.89
黄酮截留率
/%4.335.103.914.45
注:1)银杏叶提取液黄酮量[email protected]%@82.0%
第2期 高琳等:银杏叶提取物精制工艺的研究 表2结果表明,提取液可用超滤除去相对分子质量大于3万的杂质而黄酮损失很少(黄酮甙的相对分子质量为700左右),超滤净化后的提取液经树脂吸附、单次洗脱可制得总黄酮的含量较高(平均25.32%)的提取物,黄酮总收率达78.50%.按文献[4]工艺条件,溶剂提取银杏叶黄酮提取收率为82%,若不考虑树脂吸附及浓缩的损失,膜对银杏黄酮的透过率在95%左右,截留部分约5%,与文献[3]研究结果(黄酮膜透过率78%,截留率12%)相比偏高,笔者认为其主要原因可能是:¹本实验对截留液(浓缩液)在适当时机进行了稀释,相当于增加了截留液超滤次数;º膜的型式及材质对超滤效果也有较大的影响,本文采用Milipore公司的卷式膜,超滤液在卷式膜柱中比在中空纤维柱中的流速高,在超滤过程中可把大部分的吸附在膜上的杂质及黄酮及时冲洗到截留液中,提高了超滤效率.
3.3 两种工艺比较
比较两种工艺,提取液制备条件相同,均进行一次树脂吸附和洗脱,尽管利用超滤工艺精制银杏叶中的总黄酮,其总黄酮收率略高出用溶剂精制的工艺2.54%.我们认为其主要原因是提取液经树脂吸附洗脱的时机不同、浓缩干燥的次数不同所致:超滤工艺是在提取液经超滤纯化除去大分子水溶性蛋白、多糖等杂质后进柱,有利于黄酮在树脂上的吸附和洗脱;溶剂精制工艺是把提取液直接进柱,需要两次浓缩和干燥,第1次浓缩干燥是在杂质较多的条件下进行的,对产品质量有
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较大的影响,经过第2次浓缩干燥后效果理想.两种工艺各有所长.作者认为,溶剂精制工艺设备简单、操作方便、容易控制,可能更适用于我国现有
企业现状.参考文献:
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REFININGPROCESSOFGINGKOBILOBALEAVESEXTRACTS
GAOLin1,MENGChun-li1,LEITian-qian2
(11HenanTextileCollege,Zhengzhou450007,China;2.ZhengzhouPharmaceuticalR&DCenter450066,China)Abstract:TherefiningprocessofGinkgobilobaleavesextractsinthepresenceofsolventwerestudiedandcom-paredwithultrafiltrationpurificationprocess.Theresultsshowedthatbothofthemcouldobtainhighqualityextracts.Thecontentoftotalflavonoidswasupto24%,andtherefiningrecoveryoftotalflavonoidswasmorethan95%.Keywords:Ginkgobilobaleaves;flavonoids;refiningprocess;ultrafiltration