HPLC检定
MV_RR_CNJ_0050高效液相色谱仪检定规程 1. 高效液相色谱仪检定规程的说明
编号 名称
JJG(教委)024-1996
(中文) 高效液相色谱仪检定规程
(英文) Verification regulation for high performance liquid chromatography
归口单位 国家教育委员会 起草单位 国家教育委员会 主要起草人 陈培榕
批准日期
年1月22日 实施日期年4月1日 替代规程号 无 适用范围 适用于新安装、使用中和修理后的具有紫外—可见光、荧光和示
差折光率检测器的高效液相色谱仪(以下简称仪器)的检定。
主要技术要求外观要求
2. 安装条件 3. 检定环境 4. 检定设备 5. 检定项目和检定方法
是否分级 无
2 检定周期(年)
2 附录数目
出版单位 科学技术文献出版社
检定用标准物质
相关技术文件
备注
2. 高效液相色谱仪检定规程的摘要
2 范围
适用于新安装、使用中和修理后的具有紫外—可见光、荧光和示差折光率检测器的高效
液相色谱仪(以下简称仪器)的检定。 2.1 原理
本仪器用于分离和测定有机混合物中的化学成分。样品以溶液状态进入色谱柱后,在流动相的推动下,逐步被分离成单个的组分。然后依次通过色谱检测器进行检测。根据各组分的保留时间和响应峰值而进行组分的定性或定量分析。 2.2 构成
其主要组成应包括方框图1的部分
图1 高效液相色谱仪组成方框图
3 计量单位
参见GB3100—93国际单位制及其应用中的有关条文。
4 计量要求
其计量特性和指标应符合表1中的规定。
5 技术要求
5.1 外观要求
5.1.1 仪器应有下列标志:仪器名称、型号、制造厂名、出厂仪器系列编号、产品合格证书及操作使用说明书。仪器外表完好,面板字迹清晰。
5.1.2 仪器整机部件:调节旋钮、按键、开关及指示灯能正常工作,电缆线插接件应接触良好。
5.2 安装条件
5.2.1 仪器应平稳地安装在牢固的操作台上,电缆接插件应紧密配合,接地良好。 5.2.2 高压气瓶与仪器的连接应使用专用管道和接头。
表 1 高效液相色谱仪计量特性和指标
5.3 检定环境
5.3.1 室内环境:应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,室内排风良好,且不应放置与测定无关的其它杂物。 5.3.2 室内温度:10℃~30℃(温度波动应不大于±3℃/操作期间;使用折射率检测器时应不大于2℃)。
5.3.3 室内相对湿度:≤85%。
5.3.4 电源:电压(220±22)V ;频率:(50±0.5)Hz 。 5.4 检定设备和试剂
5.4.1 分析天平:最大称量 100g ,最小分刻度0.01mg ,或其它微量自动电子天平。经检
* 带星号的项目为必须检定的项目。
定合格。
5.4.2 秒表:分度值应小于0.1s ,经检定合格。 5.4.3 容量瓶:50ml 10个,经检定合格。
5.4.4 玻璃水银温度计:0℃~150℃,分刻度0.1℃,1支,经检定合格。 5.4.5 注射器:10μl,50μl 各两支,经校准合格,10ml 两支。
5.4.6 标准物质和试剂:萘、硫酸奎宁为标准物质;丙三醇、异丙醇、丙酮试剂的等级和溶液的配制方法见附录B 。
5.4.7 甲醇(HPLC 纯) 、水(石英亚沸重蒸去离子水) ,及其它分析纯的无机试剂,在使用前需过滤,脱气。
5.5 检定项目和检定方法
5.5.1 泵流量的检定:连接好色谱柱和检测器,以甲醇为流动相,流量为1.0ml/min,待流速(或压力)稳定后,在流动相排出口用已称量过的容量瓶按表 2 的设定流量分别准确收集流动相,再称量。按式(1)和式(2)分别计算泵流量设定值误差S S 和泵流量稳定性误差S R 。
S S =(F m -F S )/F S (1)
F (2) S R =(F max -F min )/
式中 S S ——流量设定值误差
F m ——(m 2-m 1) ×ρi ×t ,流量实测值 m 2——容量瓶+流动相的质量 m 1——容量瓶的质量 F S ——流量设定值
ρi ——实验温度下流动相的密度 t ——流动相的收集时间 S R ——流量稳定性误差
F max ——测量列中的流量最大值 F min ——测量列中的流量最小值
F ——测量列的算术平均值
表 2 S S 及S R 的检定
流量设定值F S /(ml/min)
测量次数 流动相收集时间(t/min) 允许误差
S S S R
5% 3%
3% 2%
2% 2%
--
注:可以根据实际要求设定泵的检定流量。每当变换流量设定值后,应等待流量稳定后方可收集测量流量。测定顺序可随意选择,但对同一流量的测定应分3次设定和测量,取其平均值。
5.5.2 柱恒温箱温度的检定
按仪器说明书选择最低和最高可控温度点,将水银温度计插入柱箱内,待温度指示稳定后,记录仪器温度指示值及水银温度计指示值,每隔 10min 记录 1 次,共计 7 次,取其算术平均值,计算设定值与平均值之差Δt 及测量最大值与最小值之差t c 。 5.5.3 定性和定量重复性的检定
在仪器处于稳定的运行状态下,用微量注射器或定体积进样管注入适量的标准溶液(紫
外-可见光检测器用萘;荧光检测器用硫酸奎宁;折光检测器用丙三醇等),记录峰保留时间和峰面积,连续测量8次,分别以峰保留时间和峰面积按式(3)计算定性和定量重复性(相对标准偏差RSD ) 。
RSD =
- ―X
1
(3)
式中 X i ——第i 次测得的保留时间或峰面积
X ——n 次测量结果的算术平均值
i ——测量序号
n ——测量次数
5.5.4 紫外-可见光检测器性能的检定
基线噪声和基线漂移:按仪器说明书联接好仪器各组件。用甲醇为流动相,流量
1.0ml/min;吸收波长254nm ,范围最灵敏档;记录纸速度 5mm/min~10mm/min。待基线稳定后,运行基线 30min~40min ,测量并计算基线噪声和基线漂移。
最小检测浓度:经基线检测后,拆除色谱柱。在静态条件下,用注射器直接注入2ml ~
-
5ml 、4×108g/ml 萘的甲醇溶液于样品池中,其响应峰高应大于或等于两倍基线噪声峰峰高。按式(4)计算其最小检测量浓度。
ρ1=2×H N ×ρ/H (4)
式中 ρ1——最小检测浓度
H N ——噪声峰高(记录仪格数或实测高度) ρ——样品浓度
H ——样品峰高(记录仪格数或实测高度)
线性范围:经最小检测浓度检测后,以2%异丙醇的水溶液为甲溶液;系列丙酮-2%异丙醇的水溶液为乙溶液;用甲溶液冲洗样品池若干次,待基线稳定后,将其调至零点位置,然后依次注入0.1%、0.2%……1.0%的乙溶液于样品池中,记录各溶液的响应峰值。各重复测定 3次,取其算术平均值。对丙酮含量与峰值作图,找出曲线拐点(比理论值低5%处),此为线性范围的上限值ρh ,并按式(4)计算其最小检测浓度值ρ1,再求出ρh /ρ1比值,即为检测器(丙酮) 的线性范围。 5.5.5 荧光检测器性能的检定
基线噪声和基线漂移:连接好检测器与记录仪,吸收范围最灵敏档,激发波长345nm ,发射波长455nm ,记录纸速10mm/min。待检测器温度稳定后,在静态条件下,用注射器向样品池注入丙酮水溶液冲洗数次。然后,再注入5ml 的丙酮,堵住样品池的出口,5min 后,再注入5ml 0.05mol/L的H 2SO 4水溶液(不应有气泡),然后运行基线30min ~40min ,测量并计算基线噪声和基线漂移值。
最小检测浓度和灵敏度:经基线检测后,用注射器慢慢注入约3ml 0.05mol/L的H 2SO 4
-
水溶液于样品池中,待基线稳定后,将其调至零点位置。然后用注射器将108g/ml硫酸奎宁的硫酸(0.05mol/L)水溶液注入样品池中,其响应峰值应达到满量程的70%以上,重复测定3次,测量峰值,取其算术平均值,按式(4)计算最小检测浓度,并计算灵敏度。
线性范围:经最小检测浓度检测后,吸收范围改为中间位置,用注射器向样品池注入5ml
-5-5
0.05mol/L的 H 2SO 4水溶液以冲洗样品池。然后用注射器依次将1×10g/ml、2×10g/ml、
-5-4
3×10g/ml…1×10g/ml的硫酸奎宁硫酸(0.05mol/L)水溶液注入样品池中,分别记录其响应峰值,各重复测定3次,取其算术平均值。然后对硫酸奎宁浓度与响应峰值作图,找出曲线拐点(比理论值低5%处),此为线性上限值ρh 。并按式(4)计算其最小检测浓度值c 1,再求出ρh /ρ1比值,即为其线性范围。
-
5.5.6 折光率检测器性能的检定
基线噪声和漂移:连接好色谱柱、检测器及仪器的其它部分,以纯水为流动相,流量 1ml/min,参比池亦为纯水,范围选择最灵敏档。待仪器稳定后,运行基线30min ~40min ,测量并计算基线噪声和基线漂移值。
最小检测浓度和零敏度:拆除色谱柱,用蒸馏水冲洗样品池,范围选择最灵敏档,待基
-4
线稳定后,将其调至零点位置。用注射器将10g/ml的丙三醇水溶液注入样品池中,其响应峰值应达到满量程的70%以上,重复测定3次,测量峰值,取其算术平均值,按式(4)计算最小检测浓度,并计算灵敏度。
--
线性范围:用蒸馏水反复冲洗样品池和参比池,然后依次向样品池注入106g/ml,10
-----5
g/ml,104g/ml,2×103g/ml,3×103g/ml,4×103g/ml,5×103g/ml的丙三醇水溶液,分别记录响应峰值,对丙三醇浓度与峰值作图,求出曲线拐点(比理论值低5%处) ,此点为线性上限ρh 。用式(4)计算其最小检测浓度值ρ1,再算出ρh /ρ1比值,即为其线性范围。
说明:上述检定中使用的色谱柱均为C 18反相色谱柱。
6 计量管理
6.1 检定结果处理
经检定后的仪器,发给检定证书。在检定结论中需明确说明被检定的仪器应属于何种级别、是否合格、存在的问题和建议等。 6.2 检定周期
本仪器在正常运行的条件下,检定周期为两年,若更换部件或对仪器性能有怀疑时,应随时检定。
注: 需要查阅全文, 请与出版发行单位联系.