酵母浸出液提取方法的改进
1998,32(2):39～40/张瑞婷等 中国兽药杂志・39・
酵母浸出液提取方法的改进
张瑞婷 张立春
中国兽药监察所 北京 100081
收稿日期:1997-09-18
酵母浸出液是支原体培养基中不可能少的成份
[1,3]
孔滤板过滤除菌或经116℃ 20分钟高压灭菌后,置4℃保存备用。用此方法共制取3批酵母浸出液,批号为9659、9698及96918。1.4 培养基制备 用1.3项方法制备的3批改良酵母浸出液,及用作对照的英国产Oxiod酵母干粉,按《规程》规定的方法分别各配制3批支原体培养基及3批改良Frey氏培养基,将培养基按1.8ml/支的装量分装带胶塞的小管(1.0×10cm)中备用。1.5 培养基质量测定 对1.4项下制备的改良酵母浸出液及英国产Oxiod酵母干粉分别制成的两种培养基进行测定。取分装好的培养基,每组10支,将对数生长期的各种支原体(WVU-1853、GX11-T、S株、R株及BTS-7株)种子0.2ml分别接入每组第1管后,按10稀释法稀释至第10管(即10-10),置37℃温箱培养至第7天,以培养物颜色出现明显变化的最高稀释管作为终点,即一个变色单位[2]。为避免误差,每个样品要做3组,计算3组试验的平均值作为判定结果。2 结 果
2.1 改良法制取的酵母浸出液呈淡黄清亮液体与传统方法制备的浸出液相同。
2.2 用改良法制取的酵母浸出液配制支原体培养基及改良Frey氏培养基,培养支原体的检测结果如表1。3 讨论与结论
用本改良法提取酵母浸出液,经5株支原体标准菌株测定的数据表明均与英国Ox-oid酵母浸出干粉相一致,其质量灵敏度也达到英国Oxoid酵母浸出干粉的标准,从而[2]
×
[1]
,含有丰富核酸、核酸前体、维生
素、氨基酸及生长因子,对于促进支原体的生
长繁殖及提高支原体在培养基中生长率起到重要作用。质量合格的酵母浸出液是淡黄色或桔黄色的澄清液体。
长期以来,由于酵母浸出液的制备方法烦琐[1],加之在制备过程中某些环节掌握不当致使营养成份受到破坏。其次是制备中处理时间过长(超过72小时),使污染杂菌的概率增加,制备过程中染菌的酵母浸出液其成品颜色发暗、质量降低。受此类因素影响制备出的酵母浸出液各批次间差异很大,质量极不稳定,从而影响了各项支原体工作的正常进行。
鉴于上述问题,我们反复试验找到一种简便易行提取酵母浸出液的方法,改进其传统的制备方法,提高了支原体培养效率。经过改进后的提取方法主要是通过减少制备过程中的一些中间环节,将传统制作全过程需72小时缩短为8小时,避免了长时间处理造成污染机会增大的可能性。1 材料与方法
1.1 酵母 鲜酵母,北京第二食品厂出品;Oxoid酵母浸出干粉(英国产)。
1.2 菌种 鸡滑液支原体WVU-1853,GX11-T;鸡毒支原体S株、R株;猪鼻支原体BTS-7均为本实验室保存。
1.3 酵母浸出液的制备 取500克鲜酵母,加1500ml双蒸水,搅拌均匀,充分溶解后煮沸15分钟,快速冷却,4000r/min离心15分钟,提取上清液,再煮沸15分钟,快速冷却,用,
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中国兽药杂志 1998,32(2):40～41/吴 金等
份没有受到破坏,能满足支原体生长繁殖的需要。
表1 培养基质量测定结果
检测菌株WUV-1853GX11-7S株R株BTS-7
改良Frey
酵母浸出液批号及酵母干粉(英国产)
培养基
969510-10-10101010
冰箱保存,用时116℃灭菌20分钟。该提取方法操作复杂,制备时间过长。改进后的方法操作简单,节省时间,避免了各批次间存在的质量差异,同时避免了因质量不合格造成原材料的浪费。
酵母浸出液提取方法的研制成功,为各单位支原体研究、检测工作的开展,提供了简便的制备培养基的条件。参考文献
[1]
干粉10-10-10-10-10-10101010
969810-10-10-10-10-101099
干粉96918干粉10-10-10-10-10-1010109
10-10-10-10-10-
991010
10-10-10-10-10-
1091010
培养基10-10-支原体
10-培养基
99991010
1 中华人民共和国农业部.中华人民共和国兽用生物制
品规程.一九九二年版
2 陈天寿主编.微生物培养基的制造与应用.北京∶中
国农业出版社,1995,474
3 RCoteMA.ATCCMediaUnit.ATCCMediahand-book.Firstedition,1984,24
酵母浸出液传统的制备过程要加氯仿,置55℃恒温中自溶,每天摇动2次,3天后取出,经离心弃沉淀,其上清用布氏滤器滤过,用氢氧化钠调整pH至7.8,滤过,静置4℃
浅谈生物制品的污染
吴 金 武润杰
黑龙江省生物制品一厂 哈尔滨 150069
收稿日期:1997-04-16
污染是生物制品的大敌,每年因污染而废弃生物制品的要占一定的比例,造成很大的经济损失。同时污染也影响着生物制品的质量,然而污染又是可以控制的。
经过多年生物制品工作的实践,我们认为污染的来源主要有以下几方面:1 生产环境所引起的污染
在生产环境中,避尘室是生物制品生产过程中所必备的设置。首先,避尘室的建造应该合理,便于清洁和消毒,以达到无尘和基本无菌的目的。避尘室封闭要严密,缓冲间的门和避尘室的门不能对开,以避免外界有菌空气直接流入。同时缓冲间的门和避尘室的门均应采用拉门,以免开关时空气振动造成污传递器材等物品。
目前,洁净室在国内已广泛建立。有的生物制品厂已根据GMP标准建造了菌(疫)苗楼;有的厂家在原有避尘室的基础上,经过改造也建造了洁净室。洁净室的净化程度可达到万级,有的局部可达到百级。可是部分厂家由于种种原因仍然使用老式普通避尘室进行菌(疫)苗的生产。这样的避尘室在使用前必须进行除菌消毒。常用的方法是先清扫干净,以消毒药液0.1%的新洁尔灭溶液或2.5～3%的石碳酸溶液擦顶棚、四壁、工作台、凳和地面,然后再进行薰蒸消毒。连续生产,一般每周薰蒸一次。可采用丙二醇或甲醛薰蒸,薰蒸后再用氨水中和。细胞培养室为避免化学,