氯吡脲在葡萄中的残留分析方法及消解动态
第50卷第10期2011年10月农 药
AgrochemicAlsVol. 50, No. 10oct. 2011
氯吡脲在葡萄中的残留分析方法及消解动态
孙大利1，郑尊涛2，叶火春1，刘承兰1
广州 510642；北京 100125)(1.华南农业大学 天然农药与化学生物学教育部重点实验室， 2.农业部 农药检定所，
摘要：[方法]葡萄样品中的氯吡脲使用含1%乙酸的乙腈提取，高效液相色N-丙基乙二胺(PSA)吸附剂净化，
谱-紫外检测器(HPLC-UV)检测；使用所建方法测定了氯吡脲在北京、杭州两地葡萄上的消解动态。 [结果]氯吡脲的最低检出限为0.003 mg/kg，在葡萄中的添加回收率为95%~104%，变异系数为1.0%~1.8%；在北京和杭州两地，氯吡脲在葡萄上的半衰期分别为11.6、23.1 d。 [结论]氯吡脲在葡萄中半衰期比在其他基质中更长。 关键词：氯吡脲；葡萄；残留分析；消解动态中图分类号：TQ450.2 文献标志码：A 文章编号：1006-0413(2011)10-0751-03
Residue Determination and Degradation Dynamics of
Forchlorfenuron in Grape
SUN Da-li, ZHENG Zun-tao, YE Huo-chun, LIU Cheng-lan
1
2
1
1
(1.Key Laboratory of Natural Pesticide and Chemical Biology, Ministry of Education, South China Agricultural University,
Guangzhou 510642, China; 2.Institute for Pesticide Control, Ministry of Agriculture, Beijing 100125, China)
cleaned up by PSA adsorbent and detected by HPLC with UV detector. Residue dynamics in grape were studied by this method in Beijing and Hangzhou.The results showed that the limit of detection of forcholorfenuron was 0.003 mg/kg and the recoveries ranged from 95 to 104% with coefficient of variation 1.0-1.8%. The half-lives of forcholorfenuron were 11.6 and 23.1 d in Beijing and Hangzhou, respectively. Half-lives of forcholorfenuron in grape were relatively longer than that in other matrix.forchlorfenuron; grape; residue analysis; degradation dynamics
氯吡脲(forchlorfenuron)化学名称为1-(2-氯-4-吡啶)-3-苯基脲，属苯脲类细胞分裂素。植物生长 近年来，调节剂作为外源激素被越来越广泛的用于农业生产，并为农业生产带来了巨大的经济效益。 氯吡脲作为一种新型高效植物生长调节剂，其生长促进作用效果优异，被广泛应用于果树、蔬菜、粮食作物等，我国已在猕猴桃、甜瓜等作物上获得登记，目前其使用范围还有进一步扩大的趋势。 但人体摄入量过多必然危害健康，美国环保署在《农药毒性确认和管理》第5版13章指出：长期接触氯吡脲会引起体内蛋白质代谢的紊乱、轻度的肺气肿和体形消瘦等[1-3]。
目前，有关氯吡脲在水果及蔬菜如猕猴桃、黄瓜、西瓜侯玉茹等[7]等的残留检测及其消解动态已有研究报道[4-6]；
建立了葡萄中氯吡脲残留的固相萃取-高效液相色谱检测方法。本 但有关氯吡脲在葡萄上的消解动态还未见报道，用酸性乙腈作为提取剂、文基于QuEChERS方法[8]，N-丙基乙二胺(PSA)作为吸附剂净化，建立了葡萄中氯吡脲残留的高效液相色谱紫外检测(HPLC-UV)方法，并于2010年在北
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
配Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司，紫外检测器)，QL-901型涡旋混合器(江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，KQ-600型超声波清洗器(昆山市超声仪器公司)，OSB-2000型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，TDL-40B型离心机(江苏瑞江离心机厂)，PICO-17型离心机(美国Thermo Fisher科技公司)。 氯吡脲标准品德国Augsburg公司)，N-丙基乙二胺(PSA)、C18、(纯度99%，
石墨化炭黑(GCB)(美国Agilent公司)，乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
1.2 田间试验方法
分别在北京、杭州两地进行田间消解试验，按照1次施药多次取样的方法进行。将 在葡萄籽粒生长至半果大时，浸泡0.1%氯吡脲可溶液剂60 mg/kg(制剂用量)对水稀释，设空白对果穗1次。小区面积30 m2， 每次处理设3次重复，
采集葡 于施药后2 h，1、3、5、7、10、14、21、30、45 d，京、杭州两地同时进行了氯吡脲在葡萄上的残留动态试验，照区。
萄样本。用随机方法在试验小区内上、下、左、右 取样方法：为制定氯吡脲在葡萄上安全使用标准提供科学依据。
收稿日期：修返日期：2011-07-08，2011-08-19
作者简介：孙大利(1985—)，女，四川内江人，硕士研究生，研究方向为农药残留分析。 E-mail：[email protected]。 通讯作者：刘承兰，副教授，研究方向为农产品安全。 Tel：020-85284925，E-mail：[email protected]。
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农 药 AgrochemicAls第50卷
不同部位采集6~8串(不少于1 kg)生长正常的果实。 四分法处理样品，用匀浆机捣碎成浆液，混合均匀后，分取150 g样品装入封口袋中，放于-20 ℃低温冰柜中待测。
且能很好的净化样品中的色PSA对氯吡脲的吸附能力，
素、脂类等杂质(见图1)。最终确定使用含有1%的酸 因此，性乙腈提取，用量为100 mg。PSA作为吸附剂，
表2 不同吸附剂吸附对标样吸附比较
吸附剂/mg
10 20 50 100 150
PSA 80 63 54 47 35
回收率/%C18 106 109 108 93 93
GCB 18 10 6 1 2
1.3 分析方法1.3.1 标准溶液
称取一定量氯吡脲标准品于25 mL容量瓶中，乙腈溶解，配制质量浓度1 000 mg/L母液。 并稀释成相应的标准工作液，于4 ℃条件下保存。
1.3.2 样品前处理
准确称取10 g葡萄样品置于50 mL塑料离心管中，加入2.5 mL蒸馏水，再准确加入10 mL含1%乙酸的乙腈超声提取20 min。(100 mL乙腈中加入1 mL乙酸)， 加入氯化钠6 g，涡旋1 min，取上清液3 000 r/min离心5 min，涡旋1 min，1 mL加入含有100 mg PSA的1.5 mL离心管中，
取上清液过0.22 µm有机滤膜，待10 000 r/min离心3 min，HPLC检测。
未净化100 mg PSA净化
1.3.3 HPLC检测条件
图1 葡萄空白样品未净化与100 mg PSA净化色谱图
进样体积20 µL；检测波长265 nm；外标法定量；氯吡脲的相对保留时间6.28 min。
表1 高效液相色谱梯度洗脱条件
1
时间/min 0.002 mol/L磷酸水溶液-乙腈体积比 流速/(mL•min) 0 60 : 40 0.8 7 60 : 40 0.8 8 95 : 5 1.0 20 60 : 40 0.8
-
色谱柱：Agilent HC-C18柱(5 µm×4.6 mm×250 mm)； 2.2 方法准确度与精密度 流动相：梯度洗脱(见表1)；0.002 mol/L磷酸水溶液-乙腈，取空白葡萄全果样品，添加3个质量分数(添加水平分
别为0.01、每个添加0.05、1.00 mg/kg)的氯吡脲标准溶液，水平重复5次，按上述所建方法进行测定及计算回收率和变异系数，结果见表3。 当添加水平为0.01~1.00 mg/kg时，方法回收率为95%~104%，相对标准偏差为1.0%~1.8%。 说明该方法的准确度和精密度较好，符合农药残留的检测要求。
表3 氯吡脲在葡萄中的添加回收率
-1
添加水平/(mg·kg)
0.01
2 结果与分析
2.1 样品前处理条件的建立
采用改进的QuEChERS方法提取葡萄中的氯吡脲。 QuEChERS方法在提取过程中使用无水硫酸镁除去乙腈中的少量水分，但无水硫酸镁的加入会释放热量而导致
平均回收率/%
95
102 104
相对标准偏差/%
1.4
1.01.8
0.05 1.00
2.3 最小检出限与定量限
在确定最佳条件下，用乙腈配制一系列不同质量分
部分不稳定的农药降解。 因此不采用加入无水硫酸镁，数的标准溶液进行测定，响应值以进样质量分数为x轴、
仅使用氯化钠促进水和乙腈分层，同样取得了较好的提为y轴，得标准工作曲线。在0.01~2 mg/kg线性 结果表明：取效果。
同时，研究了不同用量的PSA、C18和GCB作为吸附剂的净化效果及对目标农药氯吡脲(质量分数为0.05 mg/kg)的吸附能力。 从表2可以看出：GCB对于氯吡脲的吸附最
2
范围内，氯吡脲线性方程为y=189x+4.546，r为0.999 4。
该方法在葡萄中的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别以3倍、可得LOD为0.003 mg/kg，10倍信噪比(S/N)计算，LOQ为0.01 mg/kg。
回收率较高，2.4 消解动态 强，而C18对氯吡脲的吸附能力较弱，PSA次之；
但是在葡萄样品中不能很好的去除杂质的干扰。 用PSA能氯吡脲在葡萄中消解动态见图2。 北京地区葡萄够较好的去除样品中杂质的干扰，但对氯吡脲也有一定的吸附作用，且随着吸附剂用量的增加回收率降低。 然而发现在样品测定中，用含有1%的酸性乙腈提取，可明显降低
中氯吡脲的原始附着量为1.04 mg/kg，消解方程为Ct= 0.5532e
-0.063t
2
，杭州地区葡萄中氯吡脲r=0.917 2，t1/2=11.6 d；
-
的原始附着量为0.80 mg/kg，消解方程为Ct=0.794 8e0.0343t，
第10期孙大利，等：氯吡脲在葡萄中的残留分析方法及消解动态753
r=0.943 4，t1/2 =23.1 d。
2
原因可能与试验期间降雨量的大小与次数、光照条件等环境因素有关。
参考文献：
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图2 氯吡脲在葡萄中的消解动态曲线
3 结论
本研究改进了QuEChERS前处理条件，采用酸性乙腈提取葡萄中的氯吡脲农药，高效液相PSA吸附剂净化，色谱-紫外检测器检测，所建方法具有快速、简便、节约溶剂的特点，灵敏度、准确度和精密度都符合农药残留分析的要求，可以为农产品中氯吡脲残留检测提供参考。
田间试验结果表明：氯吡脲在葡萄中的半衰期分别为与在猕猴桃(半衰期为4.8~8.4 d)[5]、23.1 d(杭州)，11.6 d(北京)、
半衰期相对较长，主要西瓜(半衰期为1.2~1.67 d)中[7]相比，
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责任编辑：
李新
由基[9]，从而减轻细胞膜多不饱和脂肪酸的过氧化作用，随
由表3可知：蓄积毒性试验组与空白对照组对比中，着三氟氯氰菊酯的加入对肝脏和肝功能有实质性损伤。这说明三氟氯氰菊酯对ACP存在显著差异(0.01
小鼠肝脏中ACP有一定的影响，且随剂量的增加成剂量-反应关系，少量三氟氯氰菊酯的加入可导致肝炎，随着加入量的增加，临床上可引发前列腺癌，特别是有转移时，血清酸性磷酸酶可明显增高，导致变形性骨髓炎、原发性骨肿瘤、甲状腺功能亢进、白血病、乳腺癌、心肌梗死、肝炎、肝硬化等；这说明三AKP不存在显著差异(P>0.05)，氟氯氰菊酯对小鼠肝脏中AKP无明显的量效反应关系，虽随剂量的增加成剂量-反应关系，但对肝功能影响较小；这说明三氟氯氰菊酯对LDH存在显著差异(0.01
小鼠肝脏中乳酸脱氢酶有一定影响，且随剂量的增加成剂量-反应关系，但在临床上没有影响；SOD存在显著差异这说明三氟氯氰菊酯对小鼠肝脏中SOD有(0.01
一定的影响，且随剂量的增加成剂量-反应关系，有一定的抗衰老、抗疲劳以及清除自由基的作用；GSH-PX存在极显著差异(P
[8] [9] [6] [7]
[8]
[7]
4 结论
通过本试验研究，表明三氟氯氰菊酯为明显蓄积物质，且对小鼠肝、肾有严重损伤。
参考文献：
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责任编辑：李新
德国爆发玉米切根虫
德国玉米委员会DMK(German maize committee)发布报告称，该国Rhineland-Palatinate州发生首起西部玉米切根虫爆发事件，同时黑森
州也发布报告称发生50起切根虫爆发事件，在Baden-Wuerttemberg州和Bavaria州也分别发生6000、并且这两州的虫害还在以比以往更143起，快的速度扩大。 在德国首次爆发玉米切根虫虫害还是在2007年。 (ZP)