麻黄连翘赤小豆汤对肝细胞性黄疸小鼠保肝退黄作用的研究_赵艺姣_陈明

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・研究报告・

麻黄连翘赤小豆汤对肝细胞性黄疸小鼠

保肝退黄作用的研究

赵艺姣，陈明

（北京中医药大学基础医学院，北京 100029）

摘要：目的：观察麻黄连翘赤小豆汤（MLC）对四氯化碳（CC14）所致小鼠急性化学肝损伤引起的肝细胞性黄疸的保肝退黄作用，并初步探讨其作用机制。方法：将60只SPF级KM雄性小鼠，随机分为6组，正常组，模型组和联苯双酯组（150mg/kg），MLC低、中、高剂量组，每组10只。连续灌胃给药7d，末次给药1h后，除正常组外，其余5组采用0.1% CC14一次腹腔注射制造CC14急性肝损伤，建立肝细胞性黄疸模型。禁食不禁水16h后摘眼球取血测定小鼠血清中总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（ALT）水平，取肝脏测定各组小鼠的肝脏指数，HE染色观察肝脏病理学变化。结果：与正常组比较，模型组肝脏指数、血清TBIL、ALT 和ALT水平均显著升高（P

关键词：麻黄连翘赤小豆汤；肝细胞性黄疸；保肝退黄；实验研究；伤寒论；急性肝损伤；四氯化碳

Study of Mahuang Lianqiao Chixiaodou Decoction on the effects of liver protecting and

jaundice removing in hepatocellular jaundice mice

ZHAO Yi-jiao, CHEN Ming

( School of Basic Medical Sciences, Beijing Uninversity of Chinese Medicine, Beijing 100029, China )

Abstract: Objective: To observe the effects of liver protecting and jaundice removing of Mahuang Lianqiao Chixiaodou

Decoction (MLC) in hepatocellular jaundice mice caused by acute chemical liver injury induced by carbon tetrachloride (CCl4) and to discuss its mechanism. Methods: Sixty SPF grade KM male mice were randomly divided into six groups, including a normal group, model group, bifendate group (150mg/kg), and low, medium and high dose of MLC group (0.14, 0.28, 0.56g/mL, respectively), 10 mice in each group. And all the mice were intragastrically administrated the corresponding agents for 7d, respectively. 1h after the last administration, 0.1% CCl4 was given to mice in all groups except the normal group in a single intraperitoncal injection to make the acute liver injury and to establish hepatocellular jaundice model. 16h of fasting but water later, the mice were sacrificed for the blood from eyeballs, and the levels of total bilirubin (TBIL), alaninc aminotransfcrasc (ALT) and aspartatc aminotransfcrasc (AST) were detect, liver index was detected from livers, and HE staining was performed for observing the pathological changes of the liver tissue. Results: Compared with the normal group, the liver index, and the levels of serum TBIL, ALT, and AST in the model group were signifi cantly increased (P

Key words: Mahuang Lianqiao Chixiaodou Decoction; Hepatocellular jaundice; Liver protecting and jaundice

removing; Experimental research; Treatise on Febrile Disease; Acute liver injury; CCl4

麻黄连翘赤小豆汤（MLC）作为《伤寒论》治黄方之一，在治疗黄疸方面有很好的理论支撑。黄疸以血清总胆红素（total bilirubin，TBIL）和酶活性的改变为重要特征，包括显性黄疸和

隐性黄疸。为了观察MLC的保肝退黄作用，本实验以四氯化碳制造小鼠肝细（carbon tetrachloride，CCl4）致小鼠急性肝损伤[1]，胞性黄疸模型，研究该方的保肝退黄作用及其可能的作用机制。

通讯作者：陈明，北京市朝阳区北三环东路11号北京中医药大学基础医学院，邮编：100029，电话：010-64287073E-mail：[email protected]

材料与方法

1. 动物 SPF级KM小鼠60只，雄性，体质量（20±2）g，斯贝福（北京）实验动物科技有限公司[中国食品药品检定研究院，动物许可证号：SCXK-（京）20011 -0004]提供。

2.药物和试剂 中药颗粒剂购于北京中医药大学东直门医院；联苯双酯滴丸（1.5mg/丸，北京协和药厂，批号：14090103）；TBIL试剂盒（批号：20151114），谷丙转氨酶（ALT）试剂盒（批号：20151107），谷草转氨酶（AST）试剂盒（批号：20151103），均购自南京建成生物工程研究所；CCl4（西陇化工股份有限公司）；橄榄油（国药集团化学试剂有限公司，批号：20150305）。

3. 仪器 Tecan全波长荧光酶标仪（瑞士TECAN集团公司），Heλios α双光束紫外分光光度计。

4. 中药的制备 药物配比按《伤寒论》原方剂量比例配制。以成人70kg所有的生药量，按体表面积折算，换算为小鼠的用药剂量。以计算得出的灌胃溶液量84mL溶解，配成浓度分别为0.14、0.28、0.56g/mL的药液，4℃冰箱保存。

5. 动物分组与治疗 将小鼠适应性饲养后随机分为6组，即正常组，模型组，联苯双酯组，MLC低、中、高剂量组，每组10只。MLC低、中、高剂量组：于造模前给药，每日两次分别以浓度0.14、0.28、0.56g/mL MLC灌胃，每次10mL/kg，连续7d。联苯双酯组：于造模前给药，用量150mg/kg，连续7d。正常组和模型组：每日灌服同量0.9%氯化钠溶液，连续7d。除正常组外，各造模组于最后一次灌胃后1h造模，以0.1％CCl4橄榄油溶液（现用现配）腹腔注射，10mL/kg，制造急性肝损伤模型，禁食不禁水16h[2-3]。

16h后处死，取血测定指标，取肝脏称重。6. 观察指标

6.1 一般情况 小鼠造模前后进食、饮水、大便、活动、皮毛等状态变化。

6.2 肝脏损伤程度测定 处死小鼠后，快速取肝脏，称重，计算肝脏指数。肝脏指数（%）=肝质量（g）/体质量（g）×100％。

6.3 肝脏病理观察 处死小鼠后，取肝脏，用10%甲醛固定，HE染色，光镜下观察组织结构和病变特点。

6.4 血清生化指标检测 小鼠摘眼球取血，检测TBIL及ALT、AST水平。检测方法严格按照试剂盒说明进行。7. 统计学方法 运用SPSS统计软件对于相关的实验数据

进行统计，实验数据用-x±s表示，组间比较采用单因素方差分析和t检验。以P

结果

1. 一般情况 小鼠造模前状态良好，进食及饮水正常，大便呈黑褐色颗粒状，毛色润泽。造模后，除正常组以外，其余小鼠均不同程度表现为反应迟缓、少动、聚堆；大便稀软或不成形，黄绿色；毛发散乱，不润泽；其中以模型组最为显著。

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2. 肝脏光镜下病理观察 见图1。正常组肝组织结构清晰可见，形态正常；模型组肝细胞体积增大，可见大量炎细胞浸润，组织液渗出，些许气球样改变，说明造模成功；联苯双酯组小鼠肝细胞结构基本恢复正常，肝细胞病变较模型组显著减轻；MLC低剂量组肝脏组织可见肝病理改变较重，可见些许炎细胞浸润，散见气球样变；MLC中剂量组肝组织病变较轻；MLC高剂量组肝实质细胞病变轻微，偶见炎细胞聚集，肝细胞

形态明显好转。

图1 小鼠肝组织病理切片（HE×20）

注：A. 正常组；B. 模型组；C. 联苯双酯组；D. MLC低剂量组；

E. MLC中剂量组；F. MLC高剂量组。

3. 肝脏指数 见表1。与正常组相比，模型组的肝脏指数明显增大（P＜0.01），亦说明造模成功。与模型组相比，MLC高剂量组的肝脏指数明显降低（P＜0.05），说明该组具有减轻CCl4肝损伤引起的肝肿大程度的治疗作用。而与联苯双酯组比较，MLC低、中、高剂量组之间均无差异，说明3组之间的治疗作用对于肝脏指数并无显著影响。

表1 各组小鼠肝脏指数（-x

±s，n=10）组别剂量（mg/kg）

浓度（g/mL）

肝脏指数（％）正常组--4.72±1.40模型组--6.51±0.22**联苯双酯组150-5.58±0.41MLC低剂量组-0.146.48±0.42**MLC中剂量组-0.285.89±0.15*MLC高剂量组

-

0.56

5.33±0.84△

注：与正常组比较，*P

P

△P

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脏受到损伤后清除胆红素的能力下降，出现了明显的胆汁淤滞。MLC可使TBIL水平下降，提示MLC能够改善CCl4急性肝损伤小鼠肝脏的分泌排泄功能，一定程度上缓解胆汁淤滞，从而达到缓解黄疸的效果。说明MLC对肝细胞性黄疸确有一定的退黄作用。另外，与正常组比较，模型组小鼠ALT和AST活性明显升高，其中ALT由（8.72±1.21）U/L升高至（31.38±1.20）U/L，AST由（14.45±0.57）U/L升高至（36.29±2.51）U/L，亦说明造模成功。给予MLC治疗后，ALT和AST出现了不同程度的降低，说明MLC可能减轻或阻断由于过氧化而引起的肝细胞损伤，从而达到降低转氨酶的效果。此外本研究病理检查结果显示MLC对CCl4所致的小鼠急性肝损伤确有一定的保护作用。

综上所述，本实验研究创新性地探索到，MLC对CCl4诱导的急性肝损伤具有显著的保护作用，其保肝退黄的作用机制可能与抗脂质过氧化反应有关。这些结果为MLC的进一步开发和利用提供了重要的实验依据，对于拓宽中药复方干预肝细胞性黄疸有一定的意义。

参 考 文 献

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（收稿日期：2015年12月30日）

4. 血清总胆红素 见表2。与正常组比较，模型组的TBIL显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，联苯双酯组和MLC高剂量组的TBIL显著降低（P＜0.01），而且MLC高剂量组的治疗效果优于联苯双酯组。说明经药物治疗后，TBIL显著降低，且MLC低、中、高剂量组的治疗效果呈剂量依赖性。

-±s，n=10）表2 各组小鼠血清TBIL（x组别正常组模型组联苯双酯组MLC低剂量组MLC中剂量组MLC高剂量组

TBIL（μmol/L）19.70±4.21228.53±18.94**104.63±3.50**△△183.05±117.57**154.51±14.1839.67±3.94△△

5. 血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶 见表3。与正常组比较，模型组的ALT、AST水平显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，联苯双酯组和MLC低、中、高剂量组的ALT水平显著降低（P

-±s，n=10，表3 各组小鼠ALT、AST（xU/L）组别正常组模型组联苯双酯组MLC低剂量MLC中剂量MLC高剂量

ALT8.72±1.2131.38±1.20**8.79±0.31△△23.62±2.68**△△▲▲16.15±2.01**△△▲▲12.92±0.33**△△▲▲

AST14.45±0.5736.29±2.51**24.73±1.71**△△36.53±2.41**▲▲35.67±0.73**▲▲29.45±0.68**△△▲▲

讨论

CCl4所致急性肝损伤模型是最常用的经典模型之一[4-6]，我国卫生部颁布的《中药药理肝损实验指导原则》中曾明确指定研应用CCl4肝损伤动物模型进行保肝降酶药物的药理实验[7]。究表明：肝细胞膜的脂质过氧化是CCl4介导的肝细胞损伤的主要机制[8-10]。肝细胞生物膜结构与功能的完整性的破坏，导致肝细胞损伤后胆汁可以直接渗入到淋巴间隙，肝细胞受损[11]。

而后进人血液，导致TBIL升高，以及相应转ALT，AST升高。

《伤寒论》MLC方中麻黄解在表之邪，连翘清透邪热之结而解郁，赤小豆利水湿，清化湿热；杏仁与麻黄相配而宣肺利水湿；桑白皮清肺热，兼利水湿；生姜、大枣与炙甘草调和脾胃，其药味配伍精当，外解内利，表里双解，开鬼门、洁净腑兼而有之，因此用于治疗湿热郁结发黄而表邪不解者，效果肯定。

本研究结果显示：模型组小鼠TBIL水平显著升高，说明肝

[12]

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