血红蛋白的测定
实验四 血红蛋白的测定
1.本次实验的目的和要求
了解和练习沙利氏比色法测定血红蛋白含量。
2.实验内容或原理
血液加入稀盐酸后,血红蛋白转化成不易变色的棕色的高铁血红蛋白,可与标准比色板进行比色,从而测得血红蛋白含量。
3.需用的仪器或试剂等
人或动物。沙利氏血红蛋白计、酒精棉球、0.1mol/L盐酸、蒸馏水等。
4.实验步骤
(1) 先检查血红蛋白计的测定管和吸血管是否清洁,如不清洁则依次用自来水、蒸馏水
(3次)、95%酒精(2次)和乙醚(1~2次)清洗。
(2)将0.1mol/L盐酸加入测定管中至刻度“2”或“10%”处。
(3)用酒精棉球消毒采血部位,以采血针采血,用吸血管插入流出的血滴深处,吸血至
刻度20ul处,拭净外壁,将血液立即吹入测定管的盐酸中。反复吸吹,使吸血管中血液全部进入盐酸液中(避免起气泡)。混匀,10min后,逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅,边加边混匀并与标准比色板比较,至二者颜色相同止。
(4)读出测定管内液体凹面最低处的刻度,即为每100mL血液中血红蛋白的克数。
另一方面刻度表示百分率,可参照血红蛋白计的说明换成克数以核对读数。
实验五 红细胞脆性的测定、
1.本次实验的目的和要求
测定红细胞膜对不同低渗溶液的渗透抵抗力.亦即测定正常动物红细胞的渗透脆性。了解红细胞沉降率并掌握其测定方法。了解红细胞凝集现象,并掌握测定血型的方法。
2.实验内容或原理
内容:实验室可完成红细胞脆性实验,血红蛋白含量检测的实验内容。做到改变某些因素时的检测内容,结合实验理解红细胞脆性的概念,分析论证产生的结果。
原理:
(1)通过实验了解正常的红细胞悬于等渗的血浆中,若置于高渗溶液内,则红细胞失去
内部液体而皱缩,反之,置于低渗溶液内则水分进入红细胞,使红细胞两面凹陷的圆盘型变为球型,如继续膨大,即发生破裂溶解,形成溶血。
(2)红细胞膜含有凝集原,血浆内含有凝集素。当相应的凝集原和凝集寨相互作用时,
就产生红细胞的凝集现象。
3.需用的仪器或试剂等
电子天平、水浴箱、电子称、低速离心机、微量移液器、标准枪架等。
4.实验步骤
(1)取试管10支,按不同比例向各管内加入1%NaCL溶液和蒸馏水,充分混匀.使各试
管溶液均为2ml。并在各试管中加人大小相等的血液1滴,用拇指堵住试管口,慢慢倒置一、二次,使血液与管内盐水混合均匀。室温静置1小时,观察结果。
(2)将容积比例为1:4的抗凝血吸到清洁、干燥的血沉管至最高刻度“0”处,绝对避
免产生气泡。然后将吸有血液的血沉管垂直置于血沉管架上,按不同时间分别记录。
(3)取一载玻片,在左上角和右上角分别写上“A”和“B”字作为标记。各用小滴管分
别吸取A型标准血清及B型标准血清滴入已经记过A和B字样的两侧各一滴。然后再各加人一滴受检者的血液。用细玻棒的一端混合A型血清与血液,用另一端混合B血清与血液。置室温下10-30min后,在低倍镜下观察有无凝集现象。