真菌胞内蛋白质提取方法的建立

５９０第３８卷　第３期２０１２年５月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版））ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ　　　　ｙ（Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．３　Ｍａ０１２　２ｙ

）文章编号］６７１５８７２０１２０３０５９００５　　［　１－Ⅹ（－－

真菌胞内蛋白质提取方法的建立

２３，姜兰香１，张　宇２，，贺　丹２，田　庄２，高　嵩２，横山耕治４，王　丽２王　爽１，

（吉林大学第二医院皮肤科，吉林长春１吉林大学白求恩医学院病原生物学系，吉林长春１．３００４１；２．

）吉林大学第二医院检验科，吉林长春１日本千叶大学真菌研究中心，日本千叶２１３００２１；３．３００４１；４．６０８６７３－

［摘　要］　目的：研究不同的提取方法对白假丝酵母和茄病镰刀菌胞内蛋白质浓度、种类及数量的影响，为建立一种稳定可靠的真菌胞内蛋白质提取方法提供依据。方法：分别以白假丝酵母菌和茄病镰刀菌为研究对象，

、３ｍ、５ｍ，１，超声波功率为３培养时间为３６、４８和７２ｈ，超声波工作时间为２０ｓｉｎｉｎ０ｍｉｎ３２．５和４７５．０Ｗ，

通过蛋白质浓度检测和ＳＤＳＡＧＥ蛋白质电泳分析，比较不同条件下提取的蛋白质浓度、种类及数量，观察不－Ｐ

同因素对蛋白质提取效果的影响。结果：２株真菌均在培养３６ｈ时提取胞内蛋白质的浓度最大，白假丝酵母在功率３３２．５Ｗ、超声３ｍｉｎ时得到胞内蛋白质的数量和种类最多，茄病镰刀菌在功率３３２．５Ｗ、超声１０ｍｉｎ时得到蛋白质的数量和种类最多。结论：使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取胞内蛋白质，从菌株的培养时间、超声波工作时间和功率３方面建立了真菌胞内蛋白质的最佳提取方法。

［关键词］　白假丝酵母；茄病镰刀菌；超声波；培养时间

［中图分类号］文献标志码］３７９．２　　［　Ｒ　Ａ

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ｍｅｔｈｏｄｓｆｒｏｍｆｕｎｕｓ　　ｇ

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；３，Ｓ，Ｊ，Ｃ１３００２１，Ｃｈｉｎａ．ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｅｃｏｎｄＨｏｓｉｔａｌｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｈａｎｃｈｕｎ　　　　ｐｙｐｙｇ

；４，Ｃ，Ｃ，Ｊ）１３００４１，Ｃｈｉｎａ．ＭｅｄｉｃａｌＭｃｏｌｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｈｉｂｅｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｈｉｂａ２６０８６７３ａａｎ　　　　－ｙｇｙｙｐ　

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ｃｏｍｏｓｉｔｅｌｕｓｉｎｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｍｅｔｈｏｄａｎｄｌａｓｓｂｅａｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｏｔｉｍａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆ　　　　　　　　　　ｐｙｇｇｐ　　

［收稿日期］　２０１１０８１５－－

［）基金项目］　国家自然科学基金资助课题（３０９１０１０３９０３，３０７７０１２０

［，女，吉林省长春市人，主治医师，医学博士，主要从事真菌分子学鉴定及耐药机制的研作者简介］　王　爽（１９７６－）

究。

［：，Ｅ－ｍ：ｗ）通信作者］　王　丽（Ｔｅｌ０４３１８５６１９４８６ａｉｌｌｉ９９＠ｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ－ｊ