肝素和EDTA-K2两种抗凝剂对酶类测定的影响
摘 要 目的:探讨肝素和EDTA-K2两种不同抗凝剂对常规酶ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE、CK、LDH测定的影响。方法:采用连续监测法同时对肝素和EDTA-K2抗凝血及为抗凝血进行测定,将两种抗凝血酶结果分别与血清酶结果比较。结果:肝素对ALT、AST、ALP、LDH、r-GT结果基本无影响,对CK存在程度不同的抑制作用(2%~12%),对AMS、CHE只有轻微的抑制分别<5%和4%;EDTA-K2对ALT、r-GT、CK等结果测定基本无影响,对AST、LDH、AMS有轻度抑制作用,对CHE有一定程度抑制(2%~8%),对ALP则完全抑制。结论:肝素抗凝剂基本可用于我室常规酶类测定,但对CK结果必要时如异常值或重症人群需加以修正。EDTA-K2抗凝剂可用于ALT、AST、LDH、AMS、r-GT、CK的测定,不能用于测定ALP,而用于CHE测定必要时如异常值或重症人群需加以修正。 关键词 肝素 EDTA-K2 酶类 酶这一生物催化剂,在正常机体代谢中起着重要作用。在病理情况下,尤其一些细胞内酶,当细胞损伤时会释放到液体中造成体液中酶量或酶活性改变,是酶可作为诊断指标的依据[1]。在实验室酶类测定结果有很多影响因素,特别是对临床诊断有重要作用的常用血清酶类,如ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE、CK、LDH等,保证其在适宜条件下进行测定,不仅是保证检验工作质量,更是为临床医生准确诊断疾病提供优质服务,探讨两种抗凝剂(肝素、EDTA-K2)对常用酶类测定结果是否有影响及影响程度,以便更好选取抗凝剂,现报告如下。 资料与方法 2001年3月~2010年8月体检人员60人,并同时以肝素、EDTA-K2及不抗凝管抽取标本,剔除溶血、脂血等异常标本,其中男女比例随机分布,年龄18~65岁。仪器和试剂:日立7080全自动生化分析仪;ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE酶试剂;CK、LDH酶试剂;质控为英国朗道,分为质控水平2和水平3。 方法:在仪器在控,且日常质控在控的条件下,同一人同时用两种抗凝管及不抗凝管抽取标本,充分混匀、放置,处理,剔除溶血、脂血等异常标本,进行测定,测定项目包括ALT、AST、r-GT、ALP、AMS、CHE、CK、LDH。以血清管测得结果作为参考管,分别将两种抗凝管测得结果与之比较。 统计学分析:计算偏差百分比(%)。 结 果 肝素抗凝血浆酶与血清酶结果进行比较:其中肝素管测得CK值较血清管偏低2%~12%,AMS偏低<5%,CHE<4%,其他酶均<2%。 EDTA-K2抗凝血浆酶与血清酶结果比较:AST、LDH、AMS较血清管偏低<4%,ALP测定结果几乎为零,CHE偏低2%~8%,ALT、r-GT、CK等均<2%。见表1。 讨 论 应用物理或化学方法,除掉或抑制血液中的某些凝血因子,阻止血液凝固,称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质,称为抗凝剂或抗凝物质。如天然抗凝剂(肝素、水蛭素等),Ca2+鳌合剂(柠檬酸钠、氟化钾)。EDTA盐对红、白细胞形态影响很小,根据国际血液学标准公委员会1993年文件建议,血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂,用量EDTA-K2。EDTA-NA与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小,但二钠溶解度明显低于二钾,有时影响抗凝效果,其他抗凝剂不适合于血细胞计数。肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和暑碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的黏多糖,是分散物质,分子量2000~40000,平均15000。肝素可加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶,从而具有阻止凝血酶形成,对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。 抗凝剂的使用是实验室全面质量管理的重要内容之一,属于分析前的主要影响因素。抗凝,是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固,因检查项目不同,所使用的抗凝剂不同[2],各种抗凝剂抗凝原理各有差异。若选择不适宜可能对结果造成很大误差甚至是错误的结果。 肝素是生理性抗凝剂,是一种含硫酸基团的黏多糖,抗凝机制比较复杂,主要是加强抗凝血酶Ⅲ灭火丝氨酸蛋白酶的作用来阻止凝血酶的形成。从分析数据看,ALT、AST、LDH、ALP、r-GT几种酶结果偏差均<2%,测定结果与血清基本一致;对AMS及CHE两种酶偏差也 EDTA-K2的抗凝原理是与血液中的凝血因子Ⅳ Ca2+结合成螯合物,使Ca2+失去凝血作用从而阻断凝血反应,因此使用抗凝剂将会使血液中的Ca2+、Mg2+含量下降。实验结果显示,使用EDTA-K2抗凝管测定ALT、r-GT、CK时与血清结果基本无差别;对AST、LDH、AMS结果影响甚小,偏差<4%可以用于测定;对CHE需依情况加以修正,对于异常值及危急病人考虑选择血清标本;而对ALP完全抑制,原因是EDTA-K2拮抗了ALP酶活性所需的Mg2+,不能用于测定,建议临床化学酶类检测不宜采用EDTA-K2抗凝。 参考文献 1 郑铁生,邹光楣,等.临床生物化学检验.北京:中国医药科技出版社,2004,1. 2 熊立凡,李树仁.临床检验基础.北京:人民卫生出版社,2003. 表1 不同抗凝管及未抗凝管测定酶类结果(U/L)