多管发酵法步骤和材料清单
多管发酵法测定大肠杆菌
一、
实验器材及药品:
二、
实验步骤
2.1 水样接种量
将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。
相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表1。
表1 接种用水量参考表
如接种体积为10ml则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml;如接种量为1ml或少于1ml,则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL 中。 2.2 初发酵试验
将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。 2.3 复发酵试验
轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到EC 培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养24h±2h(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)。接种后所有发酵管必须在30min 内放进水浴中。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。
三、 结果的计算
根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目,从表2 或表3 中查得每升水样中的粪大肠菌群。
接种水样为100mL2 份、10mL10 份、总量300mL 时,查表2 可得每升水样中的粪大肠菌群;
接种5份10mL 水样、5 份1mL 水样、5 份0.1mL 水样时,查表3 求得MPN 指数,MPN 值再乘10,即为1L水样中的粪大肠菌群。
如果接种的水样不是10mL、1mL 和0.1mL,而是较低的或较高的三个浓度的水样量,也可查表3 求得MPN 值,再经下式计算成每100mL 的MPN 值。
附:(两种培养基也可以直接购买)
单倍乳糖蛋白胨培养液成分;10g蛋白胨,3g牛肉浸膏,5g乳糖,5g氯化钠, 1.6%溴甲
酚紫乙醇溶液1ml,1000ml蒸馏水。配置时调节pH:7.2—7.4
EC培养液成分:20g胰胨,5g乳糖,1.5g胆盐三号,4g磷酸氢二钾,1.5g磷酸二氢钾,5g
氯化钠,1000ml蒸馏水。灭菌后pH为6.9.