气相色谱法测定月见草油脂肪酸组成
气相色谱法测定月见草油脂肪酸组成
一、实验目的
掌握气象色谱仪的结构和仪器的操作
掌握气相色谱的定量分析方法
掌握归一化方法的应用
二、实验原理
1. 仪器基本结构---框线图—说明各部分的作用
2. 色谱分析原理
(1)定性分析:采用保留时间定性-----有标样
定量分析:可用归一化计算方法的条件----及公式
归一化法
应用归一化法的前提条件是试样中各组分必须全部流出色谱柱,并在色谱图上都显示色谱峰。若试样中有n个组分,每个组分的量分别为m1、m2…mn,则其中组分i的百分含量Xi按下式计算:
Xi=
=mimi⨯100%=⨯100%mm1+m2+ +mi+ +mn
Aifi⨯100%A1f1+A2f2+ +Aifi+ +Anfn
归一化法的优点是简便、准确,当操作条件如进样量、载气流速等变化时对结果影响较小。
(2)脂肪酸测定的原理
由于脂肪酸挥发性低,为此不能直接用气相色谱测定,需将脂肪酸进行甲酯化后用气相色谱分析。然后利用归一化法测定样品中各脂肪酸含量。
脂肪酸甲酯化原理为:有机酸与甲醇在三氟化硼催化剂的存在下加热,可发生酯化反应,生成有机酸甲酯:
三、仪器及试剂
仪器:日本岛津公司ShimadazGC-2010气相色谱仪。
试剂:三氟化硼-乙醚溶液,甲醇,正己烷均为分析纯。
四、实验步骤
1.样品的处理
甲酯化:取月见草油0.2ml于试管中,加0.5mol/ml氢氧化钾-甲醇溶液1.0ml,摇匀,在60°C水浴中反应30min。取出冷却至室温后,加入3ml 14%三氟化硼-
甲醇溶液,摇匀,
在60°C水浴中加热3min,冷却至室温后,加入1ml正己烷萃取,上层溶液用于气相色谱分析。
2.气相色谱分析条件
CBP-N12-010毛细管色谱柱(12.0m×0.10mm×0.1μm);
氢火焰检测器;
气化室温度:230℃;检测器温度270℃;柱箱温度180℃;
分流比100:1;
载气:N2气,柱流速:1.0mL/min;总流速:30mL/min;
进样量:0.4μl。
3.仪器操作步骤
仪器具体操作步骤:
根据保留时间对样品中的脂肪酸进行定性,然后利用归一化方法进行各脂肪酸含量的计算。
五、实验结果及数据处理
油酸的分子式:CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH 亚油酸的分子式:CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH 亚麻酸甲酯分子式:CH3CH2(CH=CHCH2)3(CH2)6COOCH3
结构式:
十六烷酸甲酯(软脂酸,棕榈酸):
γ-亚麻酸:
亚油酸:
油酸:
油酸:
十八烷酸(硬脂酸):
计算各种脂肪酸组成:
Xi=
=mimi⨯100%=⨯100%mm1+m2+ +mi+ +mn
Aifi⨯100%A1f1+A2f2+ +Aifi+ +Anfn
六、注意事项