微生物检验规范

文 件编号

生物微检验规

范 目1

版的 页

号

次

发 布日 期

对

环境、品物人员的微生或物染污量行监测进以，少减物品因或员人对品产的污。

染2

3

范

适用于控围制内区环境物品和人员微生物、污的监控染

工。作方

法品名称物 操人员手部作工 器具位 作工 工作服面 台境 环品产初始染污菌 要 求菌细数应≤3总00 /个每只。 手细总菌数≤应01个/cm 。 菌细数总≤10 应/个mc。 细 菌数应≤1总 个0cm/ 。降沉菌总应数≤10 个/。 皿浮游菌应500 ≤/个

2m 2 22

3.1 微生物限量

求 要检频次 测1 次季/1 次 季/1 次 季/1 /次季1 /次周 降菌沉标时 1 次/超 月 注

备管道内

腔≤1cfu0/件

次3

.2手部 细总数检菌测法方3.2 1.采 数及样方 法随机抽取 0 双手，将1检被五人指并拢将浸有灭，生理盐水菌棉的签右手指曲在面从，指、甲尖到沟根处指 返往涂 抹1 0次，将棉后放签 入01m l菌灭理盐水生的试中管。 .23. 检2方验和法果计算结将采 样摇匀，管取 ml 放入灭菌1平皿内，普通琼用培脂养作倾注基养培置 ，35℃养箱中培养 2培4 小时，观 察果结求，平均菌落数。出菌数/ 只每手平均菌数×= 0 1.3 工作3服工位、具和工器台面细菌总数检测作法 方.331 .采方样法将 灭经菌的内径 5为cm 5cm×的 菌灭格板规在被放检体物表面，用一浸有 灭菌生理盐的水棉签其内涂在抹1 0 次 然，剪后去接触手部棉分棒将，签棉放入10mL 灭生菌盐理水的采管样内得试即验样。品3 3.2 采.样数：共取 量0 只1品。

物文

件 编

号

微生检物验规

范3.33.检 方验法和结果计

算 版

号 页

次发 布 日

将期每支样采摇管匀取 ，1lm放入 菌平皿内灭用普，通琼培养脂基作倾培注养，置3 5培养℃箱培养中 42小 时 ，观结察果按下式求，出平菌均落数 。数菌/ m = A/Sc×1 0式：A—平板中平上细均菌总数； S采—样面积c， 。m .43洁净 气中空降菌沉试 3.测.1 方4概法 本测试述方采用法沉降法，菌通过自即沉然降菌原理收在集空气的中物生粒子培于养平皿内经，干时间，在若适 宜件条，下让繁其殖可见的菌落到行计进，以平板数养皿中培的落数菌来判定净洁环内境活的微物生，并以数此 来定评洁净区的净洁度。3 .4. 测试2方 法.4.2.3 1用使器仪设备和高 蒸汽压毒消器、养培、箱培基养、（皿 Φ09mm ）、大放。镜3 ..42.2 试验前备 a准 .比例将按豆大酪蛋琼脂培白养基水加后，加溶热，解分于装三烧角中于瓶力压汽消蒸器内毒1 21灭℃菌 3m0ni备 。 用.b 在无菌条件，将下豆大蛋酪白琼脂养培（约 45基℃倒入）Φ 90m 已m菌的灭培皿养内混匀，，待凝后固，在 03℃3~℃5温恒中培箱 养4h，8明无菌方证可用。使 3.4.2.3采样 点a. 《按净洁区

洁净度检规验》附件程平中布面图的点要放求置 ；. b每个采样在放置点3 个培 养皿；平 c. 作区工样采点置离地位 .80～m1.5 左m（右高于工略作面 ； d） 可.关键在设备或键关工活作动范围处增加采样点 。3.42.4 .采方法样 静态试测，培养时皿露暴时间 3为0mn i上;以态测动试，培养皿暴时时间露不大为 天h,再4将培皿养上后 倒盖置 。.3.425 .培 全养部采样束结后，培将养倒皿于置恒培养箱温中 0℃3~35培℃养间时不于少48h ，批培养基每有空应白对试 验照

。 2

2

文 件编

号微生

物验规检

3.4范.26 菌.落计数

版 页

号

次

布发日 期

肉用直眼接计，数后然 5~用01倍 大放镜查检有否遗漏，，培养皿若有上 2 或 个2 以个上的菌落叠，可分辨 时仍重以2 或 个 2个以上菌落计。数3. 4.3测试规 则3 ..43. 测1条试 在件试测前，之要对洁净室（区）相参关进行经预先测试，这类数测沉试降菌的境条环件，如：这例种先测 预试或可包括：a. 温 度和对相度测湿。试净室洁区（）温的度相对和度与湿其产生及工艺求要相适（应无特要殊时，求度温在 81℃~2℃，6对相度在湿 4﹪560﹪为~）同宜时应满足测仪试器使的用围范 b；.室 送风量内或风的速试，或压差测的测试 ；.c高效过滤器 泄的测漏。 3试4.3..2测 试状态 .a 静态动和态种状态可两行测试进 b。.静 测态试，时室内试人测员不多得于 2人。 .4.3.3 测试3时 间测试在净化空应系统正常运调 3行mi0 后n开。始 3.44.结果 判断a . 用计方数得出各法个养培皿的菌数落 b.。 均菌平数的计落算平均：落菌 M1+M数+…2nMM —＝——————n 式中：M —平均—菌数 落M1——1 号培养 皿2M—2 —号培养 皿n—M— n号养皿培n——培养皿 总数 . 用c平均菌数落判断净洁区空气的微生中。 d物 洁净区的.平均落菌必数须低于定标评， 准过评超定准标， 必则须对此域先进行区毒，消然 重后采新样两次 ，测结果均试合为。格 .5 空3中浮游菌气测试

文

件 编号

生物检验规微范3.

51 .方提法

要版页

号

次

发 布 日期

方本采用计数浓度法即法通收过集悬在浮气空的生中性粒子于物专的培门基养 经，干若时间 ，在宜适的长条 件生让下繁其殖到见可的菌落行计数， 进从判定洁而环境净单内位积体空气中的微活物生数 以此来，评定洁区净洁的 净度 3.。.25 测方试 法.3.5.2 1验试仪设备器材料和微生物浮 游采菌样 器汽消蒸毒 放大器镜 恒培养箱温 豆大酪白蛋脂培琼基 培养养 皿( Φ15mm0) 超净作工台

3

..5.22试 验前准 备)a按比例将 大豆蛋酪白琼培养基脂加后，加热水解溶分，装三于烧瓶角于中压力汽蒸消毒器 内112℃菌 30灭mi n用备。b) 在 无菌件下条，大豆将

酪蛋白琼培脂基养约（45 ℃倒入）Φ9 m0 已m灭菌培的皿养内，匀，待凝混固，在 后3℃~305恒温箱中℃养培48h，证 明菌方无使用可 。c 采)口样及采管，使用前样必须入高压蒸汽放菌器内 灭211℃灭菌3 m0n。 i)d 试前测， 用75%酒擦精培拭养皿外表，采样器面顶，盖转以盘及罩内外子表面以，采及样者进手行毒。 消e) 仪经器毒消后启，仪动器使仪，器中残余消的剂毒发蒸时间，少于不5 min，并好流量，转调盘转速 。3..25.3 采样方 关法闭器仪，放培入养，皿上盖子后调盖节样器缝隙高采，度置采口样采样于后点开，启样采，根据采器器样设定 采时间样 3.5.。.4 2培养全 部样采束结后将培，养倒皿于置温恒培养箱 3中℃~35℃0培时养间不于少4 h，8每批培基养有应白对照 试验空 3。5..2. 菌5计落数用肉 眼接计数直，然用后5~ 01 倍放镜大查检有，遗漏否若，板平2 个 2 或个以的上菌数落重，叠可分辨时仍 2 以个或2 个以 菌落计数 。35.3 测试.规则同 .4.33 条 。.534 .采点数目及样布置其

文 件 编 号

生微物验规范检a.

样点置见布《洁净控区制程》平序面布图点； b .作工区测位置点离面地0 8.～m.15m左右 c.；送风口 点测位置开离风面送30 c 左右m d. 可。关在设键备或关键工作动活围处增加测范。点3 .55 .样量

版采

页号

次

发 日布期

10000 级 净区：洁每采样次量 应00L/次；140000 0级洁区净：次采每量样50 L次。/3. 5.6 样次采数 个每样采点采 样 次1。 .357.采 样注事意项a .对于向流或送风口单，样采器采样管朝向应口对气正方流。 向. b布置采样时，点少至应开离粒法较集中的子回口 风1 以m上 。c. 采样时，测人员试在站样采口下风侧。的 3..58 果计结 用算计方数得法出各培个养皿平菌的落数每，测人点浮游菌平的均浓的度计算：菌 落数 3均浓度平个/m（ = —）——— 样采量3. 5. 9果判结 a. 用定游菌平均浮度浓判洁净断空区中气的微生物。 .b每 测点个浮游的菌平均浓度须低于所必选的评定标定中准于关细菌浓的界度限 c.。 若某测点的游浮菌平均度超浓过定标评准，则须必对洁区净先域进消毒行，后重新然采两样次，两次测试 果必结合须。 3格. 产6初品污染菌 3始6.1.方 提法要 染污细菌种的类有不同，每细菌种有它都定一生理特征，培养时的对营养要，培养温度求，培养时间P， 值，H需 性质待均匀有所不同，在氧实际工作中，不可能做到满所足菌有嗜好的数度的温需氧兼氧及细菌总的。 数36.2.试 方验法3 6..2. 试1仪验器和设材料备1 000l m锥烧形 瓶 镜超净工台作蒸 汽消器 营养毒琼脂 管（试51m） l养皿(Ф90mm) 培管吸酒精灯 恒培养箱温 大

放.90无%、菌热原无氯化

钠溶液

文 件

编号 微 物生检规范 版 页验 号

次

发布 日 期

3. 6..2 检验液制2备 . 产a管道品内腔菌数染检验液制备对：导管、道类取样管用品的如输，液器注、射器 .b待 可用冲采洗法方，可用1 m0 无l无菌原 0热9%氯.钠溶液注入管道化，来回内荡 振0 1，次入放菌无试管中。 c 产品外部染.数菌检液制备：验取对样样品的用浸可无菌无热有 原09.氯%钠化溶液的灭棉菌涂抹签被（ 采表面10＜c0m 取全部表面被采表，≥10面c0 取m 10c0m往返 1 次，将 棉放签入 10ml 氯钠化液溶中,摇振 0 8(次80 /次分)钟即检验液得 3。6..23 接种培.养 a .用菌灭吸吸管 取2l 检验液分m别入注到两个菌无平皿，内皿每 ml1，每样将取 5份行样。 平.b 将化熔并至约 4冷5℃的营琼养倾脂注平皿内，皿约 每5m1l，另注一倾不个加样的品灭空菌皿，平作空白对 照。随即动转平，混匀，待皿凝固，后倒置皿，平置35℃恒 温养箱培培内 养48。h3.6 2..4 落计数及结果计算菌a. 先 肉眼观察，用数点落菌，数然后再用5 10 倍~放大检镜，以防遗查漏记，下平皿的菌各落，求出数一同 释度稀平皿生长各平均的落数菌。b 结.果计：算 平均菌数 稀释×数倍 菌数每/件（次 或g= —）——————— 件—次重量 3或..63 检规验则 .6.331 .采样量：各类产数品批每机抽随 1取0 只，在且品产入进灭菌环前抽循。取 3.63.. 2术品技部就每月质次品初产污始菌染试，试验验完成出后初始具污菌检染验果，一结三份式灭菌车， 一间份，生产一份，自留一部份。2

22